2015 Fiscal Year Research-status Report
リンの酵素的酸化反応を利用した二酸化炭素からのポリエステル微生物合成
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15K14689
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| Research Institution | Tokyo Institute of Technology |
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Principal Investigator |
柘植 丈治 東京工業大学, 総合理工学研究科(研究院), 准教授 (70332260)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 亜リン酸 / 補酵素 / ポリエステル合成 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本提案課題では、リンの酵素的酸化反応を利用して微生物細胞内での補酵素再生系を強化し、バイオポリエステル合成の効率化および二酸化炭素の資源化を試みることを目的としている。
平成27年度は、NADHおよびNADPHの両補酵素をリンの酸化反応を利用して再生するために、両補酵素に対して高い活性を示す酵素変異体を作成した。この変異体酵素を発現させるためのプラスミドを構築し、まずは大腸菌内で機能的に作用するかを確かめた。組換えた大腸菌を培養しゲル電気泳動により分析したところ、目的サイズのタンパク質の発現が認められた。また、酵素活性測定を行い、目的とする酵素活性を検出することができた。さらには、組換え大腸菌の培養において、培養液をキャピラリー電気泳動で分析し、リンの酵素的酸化反応に由来する反応生成物を確認した。これらにより補酵素の再生系が構築できていることが確認できた。初年度は主に実験系の構築に主眼を置いた準備段階だったので、次年度以降ポリエステル合成と補酵素再生系をリンクさせ、合成の効率化および二酸化炭素の資源化について検討を進める。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
初年度は主に準備段階のため、実験は当初の予定通り進んだ。今後は、実際にポリエステルの合成を行い補酵素再生の効果を検証する。
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| Strategy for Future Research Activity |
当初の予定通り実験を進める。また、二酸化炭素の資源化を視野に入れて、宿主として独立栄養細菌の利用を開始する。大腸菌の宿主系では、補酵素の再生強化によるポリエステル合成の効率化について詳細な検討を行う。
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| Causes of Carryover |
消耗品および試薬類の購入を当初の計画より抑えることができたから。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
残金は、次年度以降に人工遺伝子合成や抗体作成などに使用する予定である。
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