2016 Fiscal Year Annual Research Report
Identification of compounds that selectively inhibit rabies virus replication
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15K14859
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| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
小川 健司 国立研究開発法人理化学研究所, 吉田化学遺伝学研究室, 専任研究員 (50251418)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 人獣共通感染症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
狂犬病ウイルス（RV, Rabies virus: Rhabdoviridae, Lyssavirus）は、全長約12kbのマイナス鎖RNAをゲノムとし、ゲノム上には、N (核タンパク質)、P (リン酸化タンパク質)、M (マトリックスタンパク質)、G (糖タンパク質)およびL (RNAポリメラーゼ)の5種類のORFが存在する。この内Pタンパク質は、リボヌクレオプロテイン(RNP)複合体の構成因子であり、ウイルスの転写・複製に必須の役割を果たすと同時に、宿主の免疫応答の抑制にも働くことが知られている。また、Pタンパク質は、宿主の細胞内輸送において重要な役割を果たすモータータンパク質ダイニンのL鎖（LC8）と結合することが報告されており、この相互作用はRVの軸索輸送または複製に重要であると考えられている。我々は、Pタンパク質の創薬ターゲットとしての可能性に着目し、分割ルシフェラーゼとの融合タンパク質を用いた二分子化学発光相補反応によりPタンパク質とLC8の相互作用を可視化・数値化する評価系を構築した。LC8は野生型Pタンパク質とは強く結合するが、二量体形成能を欠く変異型Pタンパク質（Y128A）との結合能は著しく低いことが明らかとなった。さらに、RNP複合体の主成分であるNタンパク質とPタンパク質との相互作用を可視化・数値化する評価系の構築を試みた。Pタンパク質およびNタンパク質N末端領域と分割ルシフェラーゼ融合タンパク質発現ベクターを細胞内に導入すると、高いレベルのシグナルが得られ、Pタンパク質はNタンパク質のN末端領域と結合することが明らかとなった。一方、Nタンパク質の多量体形成に重要なNタンパク質同士の結合部位はC末端領域にあることが明らかとなった。我々の構築したこれらの評価系は、いずれもシグナル/バックグラウンド比が高く、ハイスループットスクリーニングに応用可能である。
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