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2017 Fiscal Year Annual Research Report

Study of allosteric regulation of solute transporter by a second-messenger and its structural analysis.

Research Project

Project/Area Number 15K14911
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

阿部 敬悦  東北大学, 農学研究科, 教授 (50312624)

Project Period (FY) 2015-04-01 – 2018-03-31
Keywords輸送体 / 物質生産 / 構造解析
Outline of Annual Research Achievements

1. AAEx輸送体の基質輸送制御の解析
平成28年度に確立した、精製AspTを各種リガンド共存下で熱処理した後に、AspTのトリプトファン蛍光を検出する蛍光ゲルろ過クロマトグラフィー(FSEC)を用いて未変性AspTピークの定量を行って、構造解析に向けてさらに安定化条件を決定した。その結果、基質L-Asp, L-Ala, Naイオン, pH5-6の弱酸性条件が熱安定化要因であることに加えて、glycerol20-30%、界面活性剤DDM0.01-0.1%で安定であることが明らかとなり、結晶化で障害になるDDMの低減条件を見出した。
2. AAEx輸送体の結晶化と立体構造解析
1 で見出した安定化条件を用いて結晶化スクリーニングを行ったところ、複数の条件で結晶が得られ、高エネ研で4.3--6.0ÅのX線回折データが得られた。また、さらに良い結晶を得るためにFSEC法を用いてAspTの耐熱性変異体を造成した。そのうちAspTG439W変異体は野生株比で5℃程度耐熱性が向上しており、結晶化スクリーングでは野生型とは異なる条件で結晶が得られ、高エネ研での解析で3.8-5.8Åの回折データが得られた。現在、3Å以下のデータが得られるような結晶のスクリーニングを継続している。AspTG439Wの輸送活性は、野生型の10%程度であり、輸送反応サイクル中の複数のコンフォメーションのうち、どれかの存在比率が高くなっていると思われる。

  • Research Products

    (8 results)

All 2018 2017

All Journal Article (2 results) (of which Peer Reviewed: 2 results) Presentation (6 results)

  • [Journal Article] Identification of EayjjPB encoding a dicarboxylate transporter important for succinate production under aerobic and anaerobic conditions in Enterobacter aerogenes.2018

    • Author(s)
      Fukui K., Nanatani K., Hara Y., Tokura M., K. Abe
    • Journal Title

      J. Biosci. Bioeng.

      Volume: 印刷中 Pages: 印刷中

    • DOI

      10.1016/j.jbiosc.2017.12.007

    • Peer Reviewed
  • [Journal Article] Escherichia coli yjjPB genes encode a succinate transporter important for succinate production.2017

    • Author(s)
      Fukui K., Nanatani K., Hara Y., Yamakami S., Yahagi D., Chinen A., Tokura M, and K. Abe
    • Journal Title

      Biosci. Biotech. Biochem.

      Volume: 81 Pages: 1363-1368

    • DOI

      10.1080/09168451.2017.1345612

    • Peer Reviewed
  • [Presentation] Aspartate:Alanine 交換輸送体 AspT の立体構造解析に向けた高発現系・精製系の構築2017

    • Author(s)
      宮本 あかり,〇國井 宏太,光岡 薫, 小笠原 諭,七谷 圭,阿部 敬悦
    • Organizer
      酵素・補酵素研究会2017
  • [Presentation] 乳酸菌由来アミノ酸トランスポーターの基質結合による熱安定化2017

    • Author(s)
      金ななせ、千葉文香、小笠原諭、〇七谷圭、阿部敬悦
    • Organizer
      第12回トランスポーター研究会年会
  • [Presentation] 乳酸菌由来アミノ酸トランスポーターの基質結合によるコンフォメーション変化2017

    • Author(s)
      鈴木聡美、木村拓哉、七谷圭、〇阿部敬悦
    • Organizer
      第12回トランスポーター研究会年会
  • [Presentation] 乳酸菌 Tetragenococcus halophilus 由来Aspartate : Alanine 交換輸送体 AspTの多量体構造の解明2017

    • Author(s)
      宮本あかり 、國井宏太、黒野健一郎、七谷圭、〇 阿部敬悦
    • Organizer
      日本乳酸菌学会2017年度大会
  • [Presentation] Aspartate:Alanine交換輸送体AspTの結晶化へ向けた熱安定変異体探索2017

    • Author(s)
      ○千葉文香、金ななせ、七谷圭、阿部敬悦
    • Organizer
      生物工学会北日本支部シンポジウム2017福島
  • [Presentation] 大腸菌Ala排出機能欠損株を用いた乳酸菌 Tetragenococcus halophilus 由来Aspartate : Alanine 交換輸送体 AspT の輸送評価系の構築2017

    • Author(s)
      増田歩、七谷圭、勝部哲、米山裕、阿部敬悦
    • Organizer
      生物工学会北日本支部シンポジウム2017福島

URL: 

Published: 2018-12-17  

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