2015 Fiscal Year Research-status Report
マウス亜系間比較による新規コレステロール吸収制御因子の探索
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15K14996
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
山梨 義英 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (20582018)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | コレステロール / 消化管吸収 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
コレステロールの消化管吸収は、肝臓での生合成と並んで体内のコレステロールレベルを制御する重要なプロセスである。これまでに、消化管の間腔側膜に発現するNPC1L1がコレステロール吸収担体として機能していることは明らかとなっているが、その活性（または発現量）制御因子や、取り込まれたコレステロールをリンパ管へと排出する因子は未解明のままである。このような背景の中、申請者は、マウス亜型間でコレステロールの消化管吸収量が大きく異なることを見出した。本申請研究では、この吸収効率の違いを説明しうる因子を探索・同定することで、新規の消化管コレステロール吸収制御因子を見出すことを目的としている。
本年度（平成27年度）は、各マウスにおける消化管NPC1L1の発現量の検討と、新規コレステロール吸収制御因子を探索するためのプロテオーム解析の準備を進めた。マウス亜型間において小腸NPC1L1の発現量の違いを検討するために、各マウスの小腸から抽出したRNAを用いて、定量的RT-PCRを行った。その結果、各マウスでNPC1L1のmRNAレベルに有意な違いは認められなかった。また、蛋白質発現量についてもWestern blottingで検討を行ったが、違いは認められなかった。これらの結果から、マウス亜型間における消化管コレステロール吸収量の違いは、NPC1L1の発現量の違いが原因でないことが示唆された。そこで、プロテオーム解析により、コレステロール吸収量の違いをもたらす新規因子の探索を行うこととした。本年度は主に解析系の構築を進めた。これまでに、Orbitrap型質量分析機とナノフロー液体クロマトグラフィーを組み合わせたnanoLC-MS/MSシステムを用いることで、生体（臓器）試料や培養細胞試料のプロテオーム解析を行うことが可能となった。次年度は、構築したプロテオーム解析系を用いて、当該因子の探索を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
各マウスにおけるNPC1L1の消化管発現量に関する検討が計画通りに進められ、また、消化管コレステロール吸収の新規制御因子を見出すためのプロテオーム解析系の構築も順調に進んだため。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究２年度目となる次年度（平成28年度）には、１年度目に構築されたプロテオーム解析系を駆使して、マウス亜型間で消化間における発現量が異なる因子の探索を進める。また、見出された因子がコレステロール吸収に及ぼす影響について、in vitro・in vivoの両面から検討を進め、消化間コレステロール吸収を制御する新規因子の同定を目指す。
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| Causes of Carryover |
平成27年度の収支状況報告書において、次年度使用額が存在するが、プロテオーム解析で見出された候補タンパク質を発現（またはノックダウン）するアデノウィルスの構築を平成27年度に行わず、平成28年度へと予定を変更したことによる。候補タンパク質の遺伝子クローニングおよび発現プラスミドの構築は順調に進んでいるため、今後は、これらタンパク質を発現（またはノックダウンする）アデノウィルスの作製・精製に移り、本年度予定されている各種マウスを用いたin vivo実験に使用する計画である。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
平成27年度と同様、各種試薬や実験用動物購入費用などの消耗品費として主に使用することになるが、一部は得られた研究成果を学会において発表するための旅費、国際誌への論文投稿のための校閲費・印刷費・研究成果投稿料としての謝金・その他の費用として使用する予定である。
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Research Products
(10 results)
