2015 Fiscal Year Annual Research Report
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15K15024
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
中山 啓子 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60294972)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
舟山 亮 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20452295)
中川 直 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30707013)
細金 正樹 東北大学, 医学(系)研究科(研究院), 助手 (30734347)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2016-03-31
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| Keywords | 腫瘍形成 / CRISPR/Cas9 / 次世代シークエンサー / 乳癌細胞株 / 免疫不全マウス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
がんゲノムの解析によって、固形腫瘍を構成している細胞は決してクローンではなく、むしろ様々な細胞が共生することで腫瘍としての増殖や転移が可能となっていることが示唆されている。そこで本研究ではどのような特徴を持った細胞が共生することががんを構成するために必要であるのかを探索した。腫瘍形成能が比較的低い事が確認されている乳がん細胞株MDA-MD-468細胞株にCRISPR/Cas9ライブラリーの導入によってゲノムに多様な変異を導入し、これらの細胞をマウス個体に移植し腫瘍形成を誘導した。腫瘍形成が確認されれば、この原発巣や転移巣に、どのような細胞が参加しているのかを調べることによって、腫瘍形成に求められる細胞群の形質を明らかにすることを目標としていた。
本計画は、以下の四段階からなっていた。(1) ゲノム修飾を誘導するためのCRISPR/Cas9ライブラリーの導入、(2) 免疫不全マウスでの腫瘍形成、(3) 超並列シークエンス解析による腫瘍を構成する細胞集団の決定、(4) 遺伝子変異導入細胞を用いた検証。の4段階である。
まずCRISPR/Cas9ライブラリーをMDA-MD-468細胞株への導入を試み、ライブラリーと導入した細胞から抽出したゲノムDNAのシークエンスを行った。その結果、細胞から抽出されたゲノムDNAで見られるライブラリーの多様性は、導入ライブラリーより低下していることが判明した。このことは、in vitroでの細胞死が誘導されたり、細胞増殖が抑制されるクローンが導入された細胞は、他の細胞に比しin vitroでの生存が不利であると予想していたが、その通りにアポトーシス誘導タンパク質などはライブラリー導入細胞には見られなかった。現在、これらの細胞を使って、免疫不全マウスで腫瘍形成嚢の検証を行っている。
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[Journal Article] Genomic analysis identifies candidate pathogenic variants in 9 of 18 patients with unexplained West syndrome2015
Author(s)
Hino-Fukuyo, N., Kikuchi, A., Arai-Ichinoi, N., Niihori, T., Sato, R., Suzuki, T., Kudo, H., Sato, Y., Nakayama, T., Kakisaka, Y., Kubota, Y., Kobayashi, T., Funayama, R., Nakayama, K., Uematsu, M., Aoki, Y., Haginoya, K. & Kure, S.
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Journal Title
Hum Genet
Volume: 134
Pages: 649-658
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Mutations in PIGL in a patient with Mabry syndrome2015
Author(s)
Fujiwara, I., Murakami, Y., Niihori, T., Kanno, J., Hakoda, A., Sakamoto, O., Okamoto, N., Funayama, R., Nagashima, T., Nakayama, K., Kinoshita, T., Kure, S., Matsubara, Y. & Aoki, Y.
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Journal Title
Am J Med Genet A
Volume: 167A
Pages: 777-785
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Role of the Atg9a gene in intrauterine growth and survival of fetal mice2015
Author(s)
Kojima, T., Yamada, T., Akaishi, R., Furuta, I., Saitoh, T., Nakabayashi, K., Nakayama, K.I., Nakayama, K., Akira, S. & Minakami, H.
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Journal Title
Reprod Biol
Volume: 15
Pages: 131-138
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] The artificial loss of Runx1 reduces the expression of quiescence-associated transcription factors in CD4(+) T lymphocytes2015
Author(s)
Wong, W.F., Kohu, K., Nagashima, T., Funayama, R., Matsumoto, M., Movahed, E., Tan, G.M., Yeow, T.C., Looi, C.Y., Kurokawa, M., Osato, M., Igarashi, K., Nakayama, K. & Satake, M.
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Journal Title
Mol Immunol
Volume: 68
Pages: 223-233
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Rho-Kinase Inhibition During Early Cardiac Development Causes Arrhythmogenic Right Ventricular Cardiomyopathy in Mice2015
Author(s)
Ellawindy, A., Satoh, K., Sunamura, S., Kikuchi, N., Suzuki, K., Minami, T., Ikeda, S., Tanaka, S., Shimizu, T., Enkhjargal, B., Miyata, S., Taguchi, Y., Handoh, T., Kobayashi, K., Kobayashi, K., Nakayama, K., Miura, M. & Shimokawa, H.
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Journal Title
Arterioscler Thromb Vasc Biol
Volume: 35
Pages: 2172-2184
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
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[Journal Article] S6 Kinase- and beta-TrCP2-Dependent Degradation of p19Arf Is Required for Cell Proliferation2015
Author(s)
Nakagawa, T., Araki, T., Nakagawa, M., Hirao, A., Unno, M. & Nakayama, K.
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Journal Title
Mol Cell Biol
Volume: 35
Pages: 3517-3527
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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