2015 Fiscal Year Annual Research Report

バイオ3Dプリンターを用いた尿管創生に向けた基礎的研究

Research Project

Project/Area Number	15K15070
Research Institution	Kyoto Prefectural University of Medicine
Principal Investigator	玉垣圭一京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (10626021)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	草場哲郎京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (60367365) 五條理志京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (90316745)
Project Period (FY)	2015-04-01 – 2016-03-31
Keywords	3Dバイオプリンター / 尿管再生
Outline of Annual Research Achievements	本研究では将来的に3Dプリンターを用いた尿管の作成を目標として、その基礎となる研究を行った。具体的には、用いる細胞種の選定、そして3Dプリンターには直径約0.5mmのスフェロイドと呼ばれる細胞槐を用いるが、その培養方法の確立をまず行った。当初の予定通りヒトiPS細胞から作成した中間中胚葉からFoxD1、HoxB7陽性細胞への分化、培養を行う準備を行いながら、まずは簡便に直接FoxD1、HoxB7陽性細胞のスフェロイド形成が可能かどうか、マウスの胎児よりFoxD1陽性細胞、HoxB7陽性細胞を直接抽出、初代培養することでスフェロイドの形成を試みた。 FoxD1に関して、免疫染色により胎生17.5日のマウスにFoxD1陽性細胞が存在することを確認し、Collagenase処理を行いFoxD1陽性細胞を初代培養することが可能であった。そしてそれをスフェロイド培養用のNanoCulture® Plateへ継代培養したものの、FoxD1の発現が維持されなかった。継代を経ずに直接NanoCulture® Plateへ細胞を撒布するなどの工夫によりFoxD1陽性が維持したうえでスフェロイドの構築が可能か検討中である。更に直接的にFoｘD1陽性細胞をCre-LoxPシステムを用いてFACSで集めることも考え、遺伝子改変マウスであるFoxD1-Creマウスを徳島大学より譲り受け、同マウスとレポーターマウスであるR26tdTomatoマウスと交配を開始する予定である。 HoxB7陽性細胞に関して、Cre-LoxPシステムにより直接マウスの胎児内でレポーター遺伝子を発現させた後にFACSにより細胞を集め、その細胞を培養しスフェロイドを作成することとした。遺伝子改変マウスであるHoxB7-Creを徳島大学から譲り受け、レポーターマウスであるR26tdTomatoマウスと交配を開始する予定としている。