2015 Fiscal Year Research-status Report
シトルリン化蛋白質を指標としたアルツハイマー病早期臨床検査試薬の開発
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15K15104
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| Research Institution | Tokyo Metropolitan Geriatric Hospital and Institute of Gerontology |
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Principal Investigator |
石神 昭人 地方独立行政法人東京都健康長寿医療センター(東京都健康長寿医療センター研究所), 東京都健康長寿医療センター研究所, 研究部長 (50270658)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 脳神経疾患 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、アルツハイマー病（AD）の早期臨床検査試薬を開発するため、次の3点を重点的に行う。①シトルリン化（Cit-）グリア線維性酸性タンパク質(GFAP)を高感度に検出するELISAシステムを構築し、ADの早期診断を行う臨床検査試薬を完成させる。②AD患者には、シトルリン化されたAD関連蛋白質に対する自己抗体が産生される可能性がある。そのため、Cit-GFAP,に対する自己抗体の有無を検出する検査試薬を開発する。また、③構築したCit-GFAPの高感度ELISAシステム（酵素免疫測定法）やCit-GFAP自己抗体検出試薬を用いて、ヒトでの臨床試験を実施する。
平成27年度、①ヒトGFAP組換えタンパク質（rhGFAP）とヒト2型PAD（hPAD2）組換えタンパク質を用いて、Cit-hGFAPを作製した。また、プロテオーム解析により、シトルリン化部位を同定した。②抗原としてCit-GFAPをマウスに免疫し、Cit-hGFAPに反応する8種類のモノクローナル抗体を得た。③免疫沈降を行った結果、8種類のうち5種類のモノクローナル抗体がAD脳に存在するhGFAPを免疫沈降することがわかった。また、ウエスタンブロット解析によりhGFAPとは反応せず、Cit-hGFAPに強く反応すると共に、AD脳抽出液に反応性を示す抗体CTGF-1221を見出した。④免疫組織染色により、CTGF-1221はAD脳の反応性アストロサイトを染色することがわかった。⑤固相抗体にCTGF-1221、標識抗体にCit-hGFAP、hGFAP両方に反応するCTGF-1214Rを用いたサンドイッチELISAを開発した。現在、開発したELISAシステムの特異性と得られたモノクローナル抗体を用いて、免疫組織染色による反応特異性を確認している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画に記載した内容を順調に行うことができた。また、非常に興味深い結果も得られた。
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| Strategy for Future Research Activity |
研究は概ね順調に進展している。現在、研究計画に変更や解決すべき課題等は特にない。
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| Causes of Carryover |
研究進行上、翌年度の使用が必要になったため。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
翌年度以降に全て使用する予定である。
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[Journal Article] Mass spectrometric identification of citrullination sites and immunohistochemical detection of citrullinated glial fibrillary acidic protein in Alzheimer's disease brains.2015
Author(s)
Ishigami, A., Masutomi, H., Handa, S., Nakamura, M., Nakaya, S., Uchida, Y., Saito, Y., Murayama, S., Jang, B., Jeon, Y.C., Choi, E.K., Kim, Y.S., Kasahara, Y., Maruyama, N., Toda, T.
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Journal Title
J. Neurosci. Res.
Volume: 93
Pages: 1664-1674
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research / Acknowledgement Compliant
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[Presentation] Detection of citrullinated proteins in the postmortem brain from wild-type and PAD2-knockout mice using newly developed anti-modified citrulline monoclonal antibodies.2015
Author(s)
Kagami, Y. Masutomi, H., Choi, E.K., Kim, Y.S., Maruyama, N., Ishigami, A.
Organizer
The 10th IAGG Asia/Oceania Regional Congress (IAGG 2015)
Place of Presentation
The International Convention and Exhibition Centre, Chiang Mai, Thailand
Year and Date
2015-10-19 – 2015-10-22
Int'l Joint Research
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