炎症カスケード解析からこじ開けるアミロイドニューロパチ―の病態制御

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K15195
• Research Institution: Kumamoto University
• Principal Investigator: 安東 由喜雄 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 教授 (20253742)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 田崎 雅義 熊本大学, 大学院生命科学研究部(保), 助教 (50613402) ; 植田 光晴 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (60452885) ; 三隅 洋平 熊本大学, 大学院生命科学研究部(医), 助教 (80625781) ; 山下 太郎 熊本大学, 医学部附属病院, 特任教授 (90381003) ; 大林 光念 熊本大学, 大学院生命科学研究部(保), 教授 (90361899)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 臨床化学

Outline of Annual Research Achievements

1.血清中の炎症性サイトカイン濃度の比較検討:FAP患者20名、健常者20名の血清中に含まれるIL-1β,IL-6,IL-12といった炎症性サイトカインの濃度をELISA法により測定、比較検討したところIL-6がFAP患者で上昇する傾向にあった。
2.患者組織アミロイドでの補体の検索:患者の組織検体を用いてアミロイド中での補体の共存を検討したところ、アミロイド中に高率にC5aが共存していた。
3.FAPモデルマウスに対する補体阻害剤の効果:上記の解析結果で病態との関連が強い補体に対する阻害剤をモデルマウスに投与し、病理学的な変化や表現型に及ぼす影響を検証してみたが有意な変化は検出できなかった。
4.末梢血単核球のフェノタイプ解析:FAP患者、健常者から採血を行い、Ficollによる PBMCの分離後、フローサイトメトリーによる解析を行う。発現を調べるマーカーとして、CD4,CD8,CD19,CD14に対する抗体を用いてT細胞、B細胞、単球などの一般的な免疫細胞の割合を算出した。更に、これらのマーカーと組み合わせて、CD16,CD163,CD206,IFN-γ,IL-4,IL-17,Foxp3等のマーカーの検出も行ったところ、炎症性の単球や炎症性のT細胞の上昇傾向が認められた。
5.組織中に存在する抗炎症作用を有するマクロファージ数の変化の検討:熊本大学で保管しているFAP患者心臓組織切片10例、FAP以外の疾患患者(主にがん患者)心臓組織切片10 例に関して、免疫組織化学染色を行い、炎症に関わる作用を有するマクロファージについてFAP患者に特異的な変化がないか検証した。マクロファージのマーカーとして、CD68,Iba1を、更に抗炎症作用を有するマクロファージのマーカーとしてCD163,CD206を検出し、その発現細胞数を算出すしたところCD163,CD206が上昇する傾向が観察された。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

27年度の研究から一部の結果で予想と異なる結果が得られたが、概ね炎症とFAPの発症・進展の関係が順調に証明されつつある。特に補体やマクロファージの関与についてはこれまでにこうした研究結果がなく新たな結果として大いに評価できる。最終的な目標はFAPに伴う炎症の様相を明らかにし、治療法にたどり着くことにあるが、本プロジェクトの1年目の成果としては大いに評価できるものと考える。
本年度も本研究プロジェクトを当初予定し他視点から推し進め、最終的には炎症制御によるFAPの病態進展を阻止する方法を考案していく。

Strategy for Future Research Activity

1. 各免疫細胞に対し TTR が与える影響の検討
健常者末梢血から、リンパ球を分離し、培養液中に TTR を共存させ、発現蛋白質の変化を解析する。具体的には、Ficoll 及び磁気ビーズを用いて各細胞を分離後、酸処理により変性・凝集させたリコンビナント TTR を培養液中に加え、数日培養後に、分泌されたサイトカインについて ELISA で濃度を測定する。また、分離した単球を M-CSF 存在下で 1　週間培養後、IFN-γ 存在下、あるいはIL-4 と GM-CSF の存在下で更に 36 時間培養し、炎症性のマクロファージと抗炎症性のマクロファージに分化させ、凝集した TTR と共培養させる。
2．TTR がマクロファージを介して炎症誘導を起こすメカニズムについての検討
アルツハイマー病においては炎症と病態との関連が強く示唆されており、その一つにマクロファージが Aβ を貪食することで細胞内の Inflammasome が活性化され、IL-1βをはじめとした炎症誘導性サイトカインが分泌されることが知られている。そこで、FAP の原因蛋白質である TTR においても同様にマクロファージの Inflammasome を活性化する作用があるか検証する。
3．培養細胞を用いた解析
培養細胞（SH-SY5Y）に変性TTRやオリゴマー、アミロイドを添加し、さらに補体や自己抗体、患者由来のマクロファージを加え、貪食能、細胞障害等の変化を解析する。

Causes of Carryover

補体に関する研究で、補体関連分子の遺伝子解析を行う必要がないと考え、その分を主体とした余剰金が生じた。これを本年度に回し、マクロファージに関する研究や培養研究に回し、これらの研究を当初の予定以上に強化するためにこのような措置を行った。

Expenditure Plan for Carryover Budget

上記研究2．TTR がマクロファージを介して炎症誘導を起こすメカニズムについての検討および3．培養細胞を用いた解析が本研究テーマの首座となるため、この部門に前年度繰り越しとなった研究費を投入する。

Research Products

• [Journal Article] Rapid detection of wild-type and mutated transthyretins. (2016)
  • Author(s): Tasaki M, Ueda M, Obayashi K, Motokawa H, Kinoshita Y, Suenaga G, Yanagisawa A, Toyoshima R, Misumi Y, Masuda T, Yamashita T, Ando Y
  • Journal Title: Ann Clin Biochem Volume: 53 Pages: 508-510
  • DOI: 10.1177/0004563215605541.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Knee osteoarthritis associated with different kinds of amyloid deposits and the impact of aging on type of amyloid. (2016)
  • Author(s): Yanagisawa A, Ueda M, Sueyoshi T, Nakamura E, Tasaki M, Suenaga G, Motokawa H, Toyoshima R, Kinoshita Y, Misumi Y, Yamashita T, Sakaguchi M, Westermark P, Mizuta H, Ando Y
  • Journal Title: Amyloid Volume: 23 Pages: 26-32
  • DOI: 10.3109/13506129.2015.1115758.
  • Peer Reviewed / Int'l Joint Research
• [Journal Article] Labial salivary gland biopsy for diagnosing immunoglobulin light chain amyloidosis: a retrospective analysis. (2016)
  • Author(s): Suzuki T, Kusumoto S, Yamashita T, Masuda A, Kinoshita S, Yoshida T, Takami-Mori F, Takino H, Ito A, Ri M, Ishida T, Komatsu H, Ueda M, Ando Y, Inagaki H, Iida S
  • Journal Title: Ann Hematol Volume: 95 Pages: 279-285
  • DOI: 10.1007/s00277-015-2549-y.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Long-term outcome of patients with hereditary transthyretin V30M amyloidosis with polyneuropathy after liver transplantation. (2016)
  • Author(s): Okumura K, Yamashita T, Masuda T, Misumi Y, Ueda A, Ueda M, Obayashi K, Jono H, Yamashita S, Inomata Y, Ando Y
  • Journal Title: Amyloid Volume: 13 Pages: 1-7
  • DOI: 10.3109/13506129.2015.1123149.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Phase 1 study of bortezomib in combination with melphalan and dexamethasone in Japanese patients with relapsed AL amyloidosis. (2016)
  • Author(s): Shimazaki C, Fuchida S, Suzuki K, Ishida T, Imai H, Sawamura M, Takamatsu H, Abe M, Miyamoto T, Hata H, Yamada M, Ando Y
  • Journal Title: Int J Hematol Volume: 103 Pages: 79-85
  • DOI: 10.1007/s12185-015-1901-2.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Effects of tafamidis treatment on Transthyretin (TTR) Stabilization, efficacy, and safety in Japanese patients with familial amyloid polyneuropathy (TTR-FAP) with Val30Met and non-Varl30Met: A phase III, open-label study. (2016)
  • Author(s): Ando Y., Sekijima Y., Obayashi K., Yamashita T., Ueda M., Misumi Y., Morita H., Machii K., Ohta M., Takata A., Ikeda S.
  • Journal Title: J Neurol Sci Volume: 15(362) Pages: 266-271
  • DOI: 10.1016/j.jns.2016.01.046.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Recipient Aging Accelerates Acquired Transthyretin Amyloidosis After Domino Liver Transplantation. (2015)
  • Author(s): Misumi Y., Narita Y., Oshima T., Ueda M., Yamashita T., Tasaki M., Obayashi K., Isono K., Inomata Y., Ando Y.
  • Journal Title: Liver Transpl Volume: 22(5) Pages: 656-664
  • DOI: 10.1002/lt.24371.
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Journal Article] Evolving landscape in the management of transthyretin amyloidosis. (2015)
  • Author(s): Hawkins PN., Ando Y., Dispenzeri A., Gonzalez-Duarte A., Adams D., Suhr OB.
  • Journal Title: Ann Med Volume: 47(8) Pages: 625-638
  • DOI: 10.3109/07853890.2015.1068949.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Two brothers homozygous for the TTR V30M both presenting with a phenotype dominated by central nervous complications. (2015)
  • Author(s): Uchida Y., Takada K., Tsugu Y., Ueda M., Yamashita Ｔ., Ando Y., Kobayashi S., Koike H.,, Watanabe T., Matsumoto T., Toyoda T., Yamada G., Matsukawa N.
  • Journal Title: Amyloid Volume: 22(4) Pages: 261-262
  • DOI: 10.3109/13506129.2015.1104661.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Inhibition of insulin amyloid fibril formation by cyclodextrins. (2015)
  • Author(s): Kitagawa K., Misumi Y., Ueda M., Hayshi Y., Tasaki M., Obayashi K., Yamashita T., Jono H., Arima H., Ando Y.
  • Journal Title: Amyloid Volume: 22(3) Pages: 181-186
  • DOI: 10.3109/13506129.2015.1064818.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Effects of liver transplantation and tafamidis in hereditary transthyretin amyloidosis caused by transthyretin Leu55Pro mutation; a case report. (2015)
  • Author(s): Kon T., Misumi Y., Nishijima H., Honda M., Suzuki C., Baba M., Inomata Y., Obayashi K., Ando Y., Tomiyama M.
  • Journal Title: Amyloid Volume: 22(3) Pages: 203-204
  • DOI: 10.3109/13506129.2015.1031373.
  • Peer Reviewed
• [Journal Article] Liver Transplantation for Hereditary Transthyretin Amyloidosis: After 20 Years Still the Best Therapeutic Alternative? (2015)
  • Author(s): Ericzon BG., Wilczek HE., Larsson M., Wijayatunga P., Stangou A., Pena JR., Furtado E., Barroso E., Daniel J., Samuel D., Adam R., Karam V., Poterucha J., Lewis D., Ferraz-Neto BH., Cruz MW., Munar-Ques M., Fabregat J., Ikeda S., Ando Y., Heaton N., Otto G., Suhr O.
  • Journal Title: Transplantation Volume: 99(9) Pages: 1847-1854
  • DOI: 10.1097/TP.0000000000000574
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Discovery of y-Mangostin as an Amyloidogenesis Inhibitor. (2015)
  • Author(s): Yokoyama T., Ueda M., Ando Y., Mizuguchi M.
  • Journal Title: Sci Rep Volume: 27(5) Pages: 13570-13570
  • DOI: 10.1038/srep13570.
  • Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
• [Journal Article] Wild-type ATTR amyloidosis of the ureter in a 56-year-old woman with rheumatoid arthritis and Sjögren’s syndrome. (2015)
  • Author(s): Shinoda K., Taki H., Obayashi K., Ando Y., Watanabe A., Komiya A., Fuse H., Tsuneyama K., Tobe K.
  • Journal Title: Int J Clin Exp Pathol Volume: 8(7) Pages: 8624-8427
  • Peer Reviewed / Open Access
• [Presentation] コンパウンドヘテロ変異を有した遺伝性トランスサイレチンアミロイドーシスの1例。 (2016)
  • Author(s): 天野朋子、植田光晴、山下太郎、三隅洋平、増田曜章、古谷博和、安東由喜雄
  • Organizer: 第213回日本神経学会九州地方会
  • Place of Presentation: 福岡
  • Year and Date: 2016-03-12 – 2016-03-12
• [Presentation] 自律神経障害からみたアミロイドーシスの多様性と診断法。 (2015)
  • Author(s): 山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第68回日本自律神経学会総会
  • Place of Presentation: 名古屋
  • Year and Date: 2015-11-29 – 2015-11-30
• [Presentation] FAP肝を移植された二次レシピエントに生じる医原性アミロイドーシスの病態解析。 (2015)
  • Author(s): 三隅洋平, 安東由喜雄
  • Organizer: 第68回日本自律神経学会総会
  • Place of Presentation: 愛知
  • Year and Date: 2015-10-29 – 2015-10-30
• [Presentation] トランスサイレチン型家族性アミロイドポリニューロパチーの治療最前線。 (2015)
  • Author(s): 山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 日本遺伝看護学会第14回学術大会
  • Place of Presentation: 熊本
  • Year and Date: 2015-10-10 – 2015-10-11
• [Presentation] 全身性アミロイドーシスに伴う手根管症候群の病態。 (2015)
  • Author(s): 山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第26回 日本末梢神経学会学術集会パネルディスカッション 2「全身疾患に伴う手根管症候群の病態」
  • Place of Presentation: 松本
  • Year and Date: 2015-09-18 – 2015-09-19
• [Presentation] シェーグレン症候群との関連が疑われたALアミロイドーシスの1例。 (2015)
  • Author(s): 波止聡司、長尾洋一郎、三隅洋平、山下太郎、前田寧、安東由喜雄
  • Organizer: 第310回日本内科学会九州地方会
  • Place of Presentation: 佐賀
  • Year and Date: 2015-08-29 – 2015-08-29
• [Presentation] アミロイドーシスの早期診断と早期治療の重要性。 (2015)
  • Author(s): 山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会 モーニングセミナー
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 家族性アミロイドポリニューロパチーの表皮内神経線維密度と臨床像の関連。 (2015)
  • Author(s): 増田曜章、植田光晴、田崎雅義、三隅洋平、山下太郎、大林光念、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] FAP肝を移植された二次レシピエントに生じる医原性アミロイドーシスの臨床像の解析。 (2015)
  • Author(s): 三隅洋平、植田光晴、山下太郎、田崎雅義、増田曜章、大林光念、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] FAP の病態における単球、マクロファージの関与と iPS-MP を利用した新規治療法開発の検討。 (2015)
  • Author(s): 末永元輝、池田徳典、千住覚、菰原義弘、本川拓誠、田崎雅義、三隅洋平、植田光晴、西村泰治、竹屋元裕、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 肝移植後も緩徐に症候が進行した集積地出身で高齢発症の家族性アミロイドポリニューロパチー症例の病理解析と生化学的検討。 (2015)
  • Author(s): 本川拓誠、植田光晴、田崎雅義、三隅洋平、末永元基、木下祐美子、豊島梨沙、黄冠男、馬翊竑、増田曜章、大林光念、山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] トランスサイレチンを発現する線虫モデルの作成と解析。 (2015)
  • Author(s): 豊島梨沙、植田光晴、山中邦俊、小椋光、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] Acquired systemic transthyretin amyloid deposits in a case with domino liver transplantation: an autopsy study. (2015)
  • Author(s): Guannan Huang, Mitsuharu Ueda, Masayoshi Tasaki, Yohei Misumi, Teruaki Masuda, Yasuteru Inoue, Genki Suenaga, Hiroaki Motokawa, Risa Toyoshima, Yumiko Kinoshita, Konen Obayashi, Taro Yamashita, Yukio Ando
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] シェーグレン症候群との関連が疑われた多発性の限局性ALアミロイドーシスの1例。 (2015)
  • Author(s): 木下祐美子、三隅洋平、長尾洋一郎、波止聡司、田崎雅義、増田曜章、山下太郎、前田寧、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 新規 portal アミロイドーシス原因蛋白質の発見 (2015)
  • Author(s): 岡本菜紗、田崎雅義、星井嘉信、植田光晴、木下祐美子、三隅洋平、増田曜章、山下太郎、大林光念、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] Cerebral amyloid angiopathyを伴ったホモ接合型ATTR V30Mアミロイドーシス。 (2015)
  • Author(s): 打田佑人、植田光晴、小林晋、小池春樹、高田幸児、継泰城、山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 肝移植後に著明なステロイド関連心筋肥大を呈した家族性アミロイドポリニューロパチーの症例解析 (2015)
  • Author(s): 坂下直実、山下太郎、中川雄伸、安東由喜雄、竹屋元裕
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] AApoAIアミロイドーシスにおけるヘパラン硫酸多硫酸化ドメインの役割。 (2015)
  • Author(s): 桑原香織、西辻和親、山下太郎、小林典裕、内村健治、安東由喜雄、斎藤博幸、坂下直実
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 透析アミロイド沈着部位に共存するグリコサミノグリカン及びプロテオグリカンの検討－病理切片を用いた免疫組織化学的観察とプロテオーム解析－。 (2015)
  • Author(s): 山口格、大越忠和、内田研造、田崎雅義、山下太郎、安東由喜雄、内木宏延
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] アミロイドβ2microglobulinのLC/MS解析。 (2015)
  • Author(s): 本宮善恢、宇治義則、末永元輝、安東由喜雄
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 免疫染色で確定診断が困難なALアミロイドーシス。 (2015)
  • Author(s): 杉本俊哉、田崎雅義、遠藤慎也、藤井絵理、山下太郎、大林光念、西村直、奥野豊、満屋裕明、安東由喜雄、畑裕之
  • Organizer: 第3回日本アミロイドーシス研究会学術集会
  • Place of Presentation: 東京
  • Year and Date: 2015-08-21 – 2015-08-21
• [Presentation] 家族性アミロイドポリニューロパチーの早期診断における皮膚生検の有用性の検討。 (2015)
  • Author(s): 増田曜章、植田光晴、野村隼也、田崎雅義、三隅洋平、山下太郎、大林光念、安東由喜雄
  • Organizer: 第56回日本神経学会学術大会
  • Place of Presentation: 新潟
  • Year and Date: 2015-05-21 – 2015-05-21
• [Presentation] 家族性アミロイドポリニューロパチーの病態解析と治療における展望。 (2015)
  • Author(s): 植田光晴、安東由喜雄
  • Organizer: 第56回日本神経学会学術大会
  • Place of Presentation: 新潟
  • Year and Date: 2015-05-20 – 2015-05-23
• [Presentation] 家族性アミロイドポリニューロパチーの心筋におけるアミロイド沈着の進展様式の解析。 (2015)
  • Author(s): 三隅洋平、大嶋俊範、植田光晴、大林光念、山下太郎、安東由喜雄
  • Organizer: 第56回日本神経学会学術大会
  • Place of Presentation: 新潟
  • Year and Date: 2015-05-20 – 2015-05-23
• [Presentation] アミロイドーシス診療体制構築事業の平成26年度病型診断の報告。 (2015)
  • Author(s): 山下太郎、田崎雅義、増田曜章、大嶋俊範、軸丸美香、高松孝太郎、三隅洋平、植田光晴、大林光念、安東由喜雄
  • Organizer: 第56回日本神経学会学術大会
  • Place of Presentation: 新潟
  • Year and Date: 2015-05-20 – 2015-05-23