2018 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidation of the actual situation of Staphylococcal food poisoning using LC-MS/MS-based simultaneous analytical method for quantification of six Staphylococcal enterotoxins
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15K15249
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| Research Institution | Osaka Institute of Public Health |
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Principal Investigator |
吉光 真人 地方独立行政法人 大阪健康安全基盤研究所, 衛生化学部, 主任研究員 (70321940)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ブドウ球菌エンテロトキシン / SEs / LC-MS/MS / ペプチド |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ブドウ球菌エンテロトキシン(SEs)には、食中毒の原因となる11種類(SEA-SEE、SEG-SEI、SER-SET)の抗原型が存在する。しかし、免疫学的検出法に基づく市販キット(従来法)では、SEA-SEEの5種類の検出、定量に限られる。一方、近年ではSEA-SEE以外の新しい毒素を原因とする食中毒事例が発生しているが、市販キットでは検査できず、対応困難とされていた。そこで、SEsを酵素消化して生じるペプチドを測定対象とし、ペプチド固有の質量を指標に測定可能な質量分析計を用い、SEs全11種類を一斉分析することを考えた。本研究では、LC-MS/MSを用いて食中毒の原因となるSEs一斉分析法を確立し、SEs食中毒の実態を解明することを目的とする。
本年度は、昨年度に続き、検査用培地および牛乳中のSEA-SEE、SEH分析法について、測定対象のペプチドおよび分析条件の検討、最適化を行った。検討では、低濃度での添加用毒素標準溶液で容器への毒素の吸着が問題となったため、その調製方法を改善した。さらに、本法では試料の前処理の工程が多く、試料への添加濃度に対する回収率が低下した。そのため、検量線用毒素標準溶液についても試料と同様の前処理を行い、定量値を補正することとした。
以上の検討により確立した分析法を用い、培地および牛乳に添加したSEA-SEE、SEHについて分析したところ、全ての毒素について分析法の妥当性が確認された。また、SEs産生培地を測定したところ、本法は従来法と定量値が概ね合致し、同等の性能を有することが示された。さらに、本法は、食中毒菌株が産生した培地中のSEHの定量が可能であった。
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