2015 Fiscal Year Research-status Report
骨髄不全におけるCXCR4陽性造血幹細胞を標的とした新規治療法の開発
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15K15360
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
中尾 眞二 金沢大学, 医学系, 教授 (70217660)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | CXCR4 / CXCL12 / 造血幹細胞 / 造血前駆細胞 / 再生不良性貧血 / iPS細胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
BRGSマウス6-8週齢18頭に9回のlineage(-) CD34(+)骨髄細胞、同じく9回のlineage(-)CD34(+)臍帯血由来造血幹細胞(hematopoietic stem cells: HSCs)を骨髄内移植し、ヒト由来の造血構築を試みたが、現在のところヒト造血の再構築は確認さできていない。移植前のHSCの純化が不十分であったことや照射線量が多すぎたことが原因のと考えられたため、分化抗原に対する抗体の種類を12から18種類に増やし、放射線照射を5.8Gyから5.5Gyに減らして検討を続けている。
造血幹/前駆細胞（HSPC）におけるCXCR4発現レベルを明らかにするため、当初臍帯血を解析したが、CXCR4発現いずれの分化段階のHSPCにも同定されなかった。一方、健常者由来骨髄では、未分化なCD34(+)CD38(-)細胞とCD34(+)CD38(+)細胞間ではCXCR4陽性細胞比率（48.8% vs. 52.2%）に差は認めなかったが、最も未分化なCD49f陽性のCD34(+)CD38(-)CD45RA(-)CD90(+)分画とCD49f陰性の同分画間ではCXCR4陽性細胞比率に大きな差（5.5% vs. 40.0%）がみられた。また、さらに一段階成熟したCD34(+)CD38(-)CD45RA(-)CD90(-)のMPPではCXCR4陽性細胞比率は41.1%、HPCのうち、CD34(+)CD38(+)CD45RA(-)CD10(-)のCMPのCXCR4陽性細胞比率は55.7%、CMPから分化するGMPとMEPにおける陽性比率はそれぞれ55.8%、38.8%であった。以上から、CXCR4は、最も未分化なHSCでは発現が低いものの、HPCへと分化が進むにつれて陽性率が高くなり、さらに成熟すると逆に発現レベルが低下すると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
BRGSマウスにおけるヒト造血幹/前駆細胞（HSPC）の再構築の確立が遅れているため、CXCR4陽性とCXCR4陰性のHSPCによる造血構築能の違いがまだ検討できていない。最近になって問題点が明らかになり、さらに、ヒト骨髄細胞中のCXCR4未分化HSPC分画が同定・純化されているため、今後は当初の計画通り、細胞周期、in vitroコロニー形成能、免疫不全マウスにおける造血再構築能などを明らかにできると考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
１．健常者の骨髄CD49f(-)CD34(+)CD38(-)CD45RA(-)CD90(+)分画におけるCXCR4(+)細胞とCXCR4(-)との間で、遺伝子発現の差異をcDNAマイクロアレイ法で比較する。両者の間で発現レベルに大きな差がみられる遺伝子を同定し、CXCR4の陰性化を誘導するサイトカインやリガンドを、単離した骨髄由来CXCR4陽性細胞及びiPS細胞から誘導したCD34陽性細胞を用いてスクリーニングする。
２．in vitroのコロニー形成法とBRGSマウスへの移植実験により、１．で得た各HSPC分画の造血支持能を評価する。
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[Journal Article] Induction of HLA-B*40:02-restricted T cells possessing cytotoxic and suppressive functions against haematopoietic progenitor cells from a patient with severe aplastic anaemia.2016
Author(s)
Inaguma Y, Akatsuka Y, Hosokawa K, Maruyama H, Okamoto A, Katagiri T, Shiraishi K, Murayama Y, Tsuzuki-Iba S, Mizutani Y, Nishii C, Yamamoto N, Demachi-Okamura A, Kuzushima K, Ogawa S, Emi N, Nakao S.
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Journal Title
Br J Haematol.
Volume: 172
Pages: 131-4
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Somatic Mutations and Clonal Hematopoiesis in Aplastic Anemia.2015
Author(s)
Yoshizato T, Dumitriu B, Hosokawa K, Makishima H, Yoshida K, Townsley D, Sato-Otsubo A, Sato Y, Liu D, Suzuki H, Wu CO, Shiraishi Y, Clemente MJ, Kataoka K, Shiozawa Y, Okuno Y, Chiba K, Tanaka H, Nagata Y, Katagiri T, Kon A, Sanada M, Scheinberg P, Miyano S, Maciejewski JP, Nakao S, Young NS, Ogawa S.
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Journal Title
N Engl J Med.
Volume: 373
Pages: 35-47
DOI
Peer Reviewed
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