2015 Fiscal Year Annual Research Report
Project/Area Number |
15K15392
|
Research Institution | The University of Tokushima |
Principal Investigator |
峯岸 克行 徳島大学, 疾患プロテオゲノム研究センター, 教授 (10343154)
|
Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2016-03-31
|
Keywords | 小児科学 / 免疫不全症 / STAT3 / ゲノム編集 |
Outline of Annual Research Achievements |
高IgE症候群の新規治療法を開発するため、高IgE症候群のモデルマウスを樹立した。正常のSTAT3遺伝子を利用して、ES細胞のおけるSTAT3-DNの発現を防ぎ、コンディショナルにStat3-DNを発現するマウス系統を樹立、これを全身にCre recombinaseを発現するマウスと交配することにより、ヒトと同様に全身組織にSTAT3-DNを発現する疾患モデルマウスを樹立した。
高IgE症候群はSTAT3遺伝子の片アレルの1塩基置換により発症する疾患であるため、その治療には、STAT3の変異アレルを特異的に切断し、野生型(WT)のSTAT3アレルを切断しないCRISPR/Cas9を使用することが必要である。そこで、2重鎖切断によりGFPの発現が誘導されるレポーターアッセイを行った。このレポーターはGFPを2つに分割し482bpのオーバーラップ領域を導入、その間に野生型または、変異体のSTAT3アレルを導入している。2重鎖切断が誘導されると、分割され蛍光を発しないGFPがsingle strand annealingによりオーバーラップ領域を介して活性を持つGFPとなり蛍光を発する。このため、野生型のStat3を持つレポーター(Stat3-WT)に対してはGFPの発現を誘導せず、変異型を持つレポーターではGFPを発現するCRISPRを探索する。このレポーターアッセイによりStat3変異体遺伝子を特異的に切断し、Stat3野生型遺伝子は切断しないCRISPRを見出すことに成功した。
|
Research Products
(10 results)
-
[Journal Article] Human TYK2 deficiency: Mucobacterial and viral infections without hyper-IgE syndrome.2015
Author(s)
Kreins AY, Ciancanelli MJ, Okada S, Migaud M, Deswarte C, Alsina L, Kotlarz D, Klein C, Muller-Fleckenstein I, Fleckenstein B, Cormier-Daire V, Rose-John S, Picard C, Hammarstrom L, Puel A, Al-Muhsen S, Abel L, Chaussabel D, Rosenzweig SD, Minegishi Y, Tangye SG, Bustamante J, Casanova JL, Boisson-Dupuis S
-
Journal Title
J Exp Med
Volume: 212
Pages: 1641-1662
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
[Journal Article] Monogeneic mutations differentially affect the quality of T follicular helper cells in pateints with human primary immunodeficiencies.2015
Author(s)
Ma CS, Wong N, Campbell DE, Stormon MO, Wong M, Adelstein S, Smart JM, Fulcher DA, Cook MC, Phan TG, Stepensky P, Boztug K, Kansu A, Baumann U, Beier R, Roscioli T, Ziegler JB, Gray P, Picard C, Grimbacher B, Warnatz K, Holland SM, Casanova JL, Uzel G, Tangye SG
-
Journal Title
J Allergy Clin Immunol
Volume: 136
Pages: 993-1006
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Int'l Joint Research
-
-
-
-
-
-
-
-