2015 Fiscal Year Research-status Report
人工ヌクレアーゼを用いた原発性免疫不全症に対する新規遺伝子変異修復療法の開発
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15K15393
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
原 寿郎 九州大学, 生体防御医学研究所, 共同研究員 (40150445)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高田 英俊 九州大学, 医学研究院, 教授 (70294931)
山元 裕之 九州大学, 環境発達医学研究センター, 学術研究員 (00710170)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 / 人工ヌクレアーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
標的遺伝子であるBTK 遺伝子を特異的に切断するCRISPR-Cas9 発現プラスミドを作製し、ヒト血球系細胞株にトランスフェクションして、配列特異的なDNA 切断効率を調べた。
ヒト血球系細胞株にヘルパー依存型アデノ・アデノ随伴ウイルスベクターを感染させることで、BTK 遺伝子を搭載したドナーDNA を細胞に導入した。さらに、CRISPR-Cas9 発現プラスミドをトランスフェクションによる細胞導入を行った。この細胞をピューロマイシンにて薬剤選択による、シングルセルクローニングを行った。得られたクローンよりDNA を抽出し、ターゲティングの頻度を算出した。結果、ヒト血球系細胞株でのターゲティング効率は、ウイルスベクター単独に比べて高効率であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼであるCRISPR-Cas9を併用することで、ターゲティング効率の向上を認めた。
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| Strategy for Future Research Activity |
平成27年度に得られた結果を基にして、in vitroで正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性造血幹細胞のターゲティング・B細胞系への分化誘導実験を試みる。ヒトXLAモデルマウスを用いた遺伝子ターゲティング解析とB細胞再構築の検討を行う。
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| Causes of Carryover |
平成27年度に行う研究と今後行う予定の研究との順番を入れ替えたため、次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性細胞でのターゲティングを行い、その経費に充てることにしたい。
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Research Products
(2 results)
