2016 Fiscal Year Research-status Report
人工ヌクレアーゼを用いた原発性免疫不全症に対する新規遺伝子変異修復療法の開発
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15K15393
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
原 寿郎 九州大学, 生体防御医学研究所, 共同研究員 (40150445)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
高田 英俊 九州大学, 医学研究院, 教授 (70294931)
山元 裕之 九州大学, 環境発達医学研究センター, 学術研究員 (00710170)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 遺伝子治療 / 人工ヌクレアーゼ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成27年度に作製した標的遺伝子であるBTK 遺伝子を特異的に切断するCRISPR-Cas9 発現プラスミドとヘルパー依存型アデノ・アデノ随伴ウイルスベクターによる、配列特異的なDNA組換え効率(ターゲティング効率)を調べた。
正常ヒト臍帯血よりCD34陽性造血幹細胞を分離した。ヒト臍帯血由来CD34陽性造血幹細胞にヘルパー依存型アデノ・アデノ随伴ウイルスベクターを感染させることで、BTK 遺伝子を搭載したドナーDNA を細胞に導入した。さらに、CRISPR-Cas9 発現プラスミドをトランスフェクションによる細胞導入を行った。この細胞をピューロマイシンにて薬剤選択による、メチルセルロース培地を用いてコロニーアッセイを行った。得られたコロニーからDNA を抽出し、ターゲティングの頻度を算出した。結果、正常ヒト臍帯血CD34陽性造血幹細胞でのターゲティング効率は、ウイルスベクター単独に比べて高効率であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
アデノ・アデノ随伴ウイルスハイブリッドベクターと人工ヌクレアーゼを併用することで、ターゲティング効率の向上を認めた。
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| Strategy for Future Research Activity |
CRISPR-Cas9システムを新たなものに変更して、in vitroで正常ヒト臍帯血由来CD34陽性細胞及び患者由来骨髄CD34陽性造血幹細胞のターゲティング・B細胞系への分化誘導実験を試みる。
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| Causes of Carryover |
CRIPSR/Cas9 システムの技術革新により、新たなタイプの有用であるCRISPR/Cas9システムが使用できるようになり、その実験を行うため、次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
新しいシステムでの追加実験と論文投稿は次年度に行い、その経費に充てることにしたい。
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Research Products
(1 results)
