毛髪特異的なCreマウスの作製

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K15412
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 下村 裕 新潟大学, 医歯学系, 准教授 (70397107)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 毛髪 / ケラチン35 / 毛髪特異的 / Creリコンビナーゼ

Outline of Annual Research Achievements

多くの謎に包まれている毛髪の分化機構を明らかにするための手法の1つとして、毛髪に発現するさまざまな遺伝子のノックアウトマウスの作製および解析が挙げられる。しかしながら、それらの遺伝子の多くが表皮や他臓器にも発現しているため、重篤な毛髪外症状を呈するという問題がある。本研究では、毛髪に特異的に発現する毛ケラチン３５（Krt35）遺伝子のプロモーターの調節下にCreリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウス（K35-Cre）を作製することを目的とする。平成27年度は、mouse Krt35 promoter (約3Kb; exon 1のstart codonより上流の配列も含む)・SV40 intron・Creリコンビナーゼ・SV40-3UTRのシークエンスを、pBluescript-SK ベクター(Stratagene)に順次クローニングした。クローニング後、BigDye Terminatorを用いてSanger sequencingを行い、すべての塩基配列が正しいかどうかを確認した。作製したベクターを制限酵素で直鎖化後、マウス受精卵前核にマイクロインジェクションした。生まれてきたマウスの耳からゲノムDNAを抽出してPCR法でジェノタイピングを試行した結果、トランスジーン陽性のF0マウスが2匹得られた。現在、F0マウスを野生型C57BL/6マウスと交配させることにより、トランスジーンをヘテロで有するF1マウスの作製を行っている。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

当初の研究計画では、平成27年度末までにF1マウスを作製する予定だった。現在、F1マウスが得られる直前の段階まで到達していることから、計画通りにおおむね順調に進展していると考えられる。

Strategy for Future Research Activity

トランスジーン陽性のマウス(K35-Creマウス）を繁殖させた後に、Rosa26-loxP-stop-loxP-EYFPマウス（B6.129X1-Gt(ROSA)26Sortm1(EYFP)Cos/J）と交配させ、EYFPが毛髪特異的に発現するかどうかについて、mRNAおよび蛋白レベルで詳細に検討を行う。その後、K35-Creマウスをbeta-cateninのflox alleleを持つマウス（B6.129-Ctnnb1tm2Kem/KnwJ）と交配させ、毛髪特異的にWntシグナルを欠失させた際にどのような毛髪異常が生じるかを解析する。

Causes of Carryover

物品購入等の納品検収は平成27年度内に完了したが、支払いが4月となったため。

Expenditure Plan for Carryover Budget

物品購入等は当該年度にすでに完了し、4月に支払いが完了している。