Generation of hair shaft-specific Cre mice

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K15412
• Research Institution: Yamaguchi University
• Principal Investigator: 下村 裕 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (70397107)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 毛髪特異的 / Creマウス / Krt35

Outline of Annual Research Achievements

本研究では、毛髪に特異的に発現する毛ケラチン35（Krt35）遺伝子のプロモーターの調節下にCreリコンビナーゼを発現するトランスジェニックマウス（Krt35-Cre）を作製することを目的とする。平成28年度に、トランスジーン陽性のF1マウスを野生型マウスと交配させることにより、トランスジーン陽性のF2マウスを作製し、更にそれらのF2マウスをRosa26-loxP-stop-loxP-EYFPマウス（B6. 129X1-Gt(ROSA)26Sortm1)と交配させ、ジェノタイピングによりKrt35(+)/EYFP(+)、Krt35(-)/EYFP(+)、Krt35(+)/EYFP(-)またはKrt35(-)/EYFP(-)のF2マウスを抽出し、それぞれの皮膚および内臓を採取してOCTコンパウンド内に封入して凍結保存した。平成29年度は、まずこれらのマウスの皮膚の新鮮凍結切片を作製して蛍光顕微鏡で観察したが、すべてのマウスで毛髪に緑色の蛍光の発色が観察された。つまり、この発色は非特異的なバックグラウンドと考えられた。そこで、抗EYFP抗体を用いて免疫染色を行い、2次抗体にAlexa594を使用することによって赤色の蛍光を発する陽性シグナルの検出を目指した。しかしながら、Krt35(+)/EYFP(+)でも陽性シグナルが毛髪に認められなかった。また、Krt35(+)/EYFP(+)の皮膚からtotal RNAを抽出してRT-PCRを施行した結果、Creの発現はごくわずかしか検出されなかった。以上の結果から、本研究で作製したKrt35-Creマウスでは、目的通りに効率よくCreリコンビナーゼを強発現しておらず、そのためにEYFPの陽性シグナルが得られなかったと結論付けた。