2015 Fiscal Year Research-status Report
転写および蛋白質レベルでのアンドロゲンによるp53機能制御機構の解明
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15K15581
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
高山 賢一 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (50508075)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | p53 / アンドロゲン / 転写制御 / 翻訳後修飾 / 前立腺癌 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は前立腺癌細胞を用いてPSFを介した転写レベルでのp53抑制メカニズムについてPSF結合や各種ヒストン修飾に関するChIP-seqを用いた解析を行った。まずホルモン療法耐性前立腺癌モデル細胞においてPSFのプロモーター領域への結合、さらにHDAC1の結合、ヒストンの脱アセチル化を確認した。またPSFの結合部位はホルモン療法耐性モデル細胞において結合分布が変化しており、興味深いことに結合部位は以前報告したCTBP1-ASの発現抑制によってその数、分布が変化することからnon-coding RNAを介したエピゲノム制御によりホルモン療法耐性化の過程においてp53の発現抑制がエピゲノムを介したメカニズムで起きていることが考えられた。さらにPSFのRIP-seqを行い結合するnon-coding RNA群を同定した。
さらにアンドロゲン依存的な翻訳後修飾メカニズムの解析のためsiRNAを用いたアンドロゲン応答遺伝子の系統的ノックダウンの実験を行った。まずp53の細胞内局在について検討するためアンドロゲン受容体(AR)のChIP-seqにより同定した直接的な応答遺伝子のなかから、遺伝子の機能について解析を行い細胞内蛋白移動に関わるpathwayに合致した計10個のアンドロゲン応答遺伝子の中でp53の細胞内局在に影響を与える遺伝子があるかを検索した。その結果、2つの遺伝子においてp53の細胞内局在（核局在もしくは細胞質局在）に関連すると思われることが示唆された。その中の一つはp53と結合することが報告されており、今後アンドロゲン依存的な細胞内局在について解析予定である。またp53の局在制御に関わる翻訳後修飾メカニズムを検討するため質量分析を用いた結合因子の同定を予定している。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は転写レベルでのp53の制御メカニズムについて解析を行い、ChIP-seqなどの次世代シークエンサー解析によりPSFによるp53の制御メカニズムについて明らかとした。翻訳後修飾については細胞内局在を中心に解析を行いアンドロゲン応答遺伝子によるp53の局在について新たなシグナル経路を同定しており概ね順調に進行している。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後の研究については質量分析によるp53と結合し得る遺伝子やその結合パートナーによるユビキチン化などの修飾へ関与する因子の同定を目指す。さらにそれらの結合パートナーによる制御がアンドロゲン処理によるp53の機能の変化に関与するかどうか機能解析を通じて確認していく予定である。細胞内局在以外にp53の転写機能を制御し得る因子の同定も同様にsiRNAを用いて検討する。さらに臨床サンプルや動物実験を通してin vivoや臨床での前立腺癌の進展との関わりを解析していく。
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| Causes of Carryover |
研究当初に平成27年に予定していたChIRP-seqは今後施行予定であり、翻訳後修飾の蛋白質レベルでの実験が先行している。このため平成28年度に次世代シークエンサーを用いた解析を追加で施行予定であり試薬の購入などで費用が必要なため繰り越した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次世代シークエンサーによるChIRP-seqやRIP-seqを行うために試薬購入費に充てる予定である。
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Research Products
(10 results)
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[Journal Article] ABHD2, an androgen target gene, promotes prostate cancer cell proliferation and migration.2016
Author(s)
Obinata D, Takada S, Takayama K, Urano T, Ito A, Ashikari D, Fujiwara K, Yamada Y, Murata T, Kumagai J, Fujimura T, Ikeda K, Horie-Inoue K, Homma Y, Takahashi S, Inoue S
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Journal Title
Eur J Cancer
Volume: 57
Pages: 39-49
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Toremifene, a selective estrogen receptor modulator, significantly improved biochemical recurrence in bone metastatic prostate cancer: a randomized controlled phase II a trial2015
Author(s)
Fujimura T, Takahashi S, Kume H, Urano T, Takayama K, Yamada Y, Suzuki M, Fukuhara H, Nakagawa T, Inoue S, Homma Y
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Journal Title
BMC Cancer
Volume: 15
Pages: 836
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Presentation] [学術奨励賞（基礎部門）] Androgen-responsive long noncoding RNA CTBP1-AS promotes prostate cancer.2015
Author(s)
Takayama K, Horie-Inoue K, Katayama S, Suzuki T, Tsutsumi S, Ikeda K, Urano T, Fujimura T, Takagi K, Takahashi S, Homma Y, Ouchi Y, Aburatani H, Hayashizaki Y, Inoue S
Organizer
日本アンドロロジー学会第34回学術大会
Place of Presentation
福岡大学病院（福岡県・福岡市）
Year and Date
2015-06-26 – 2015-06-27
Invited
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