Lineage tracing of adipose-derived stem/stromal cells in fat grafts.

2017 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K15654
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 宇田 宏一 自治医科大学, 医学部, 准教授 (20337306)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 須永 中 自治医科大学, 医学部, 講師 (00406117)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2018-03-31
• Keywords: 脂肪移植 / 系譜追跡

Outline of Annual Research Achievements

Prx1発現細胞特異的にCre recombinase（以下Cre）を発現するPrx1Creマウスと、Creを発現した細胞において赤色蛍光色素Ai14を 発現するRosa26-LSL-tdTomatoマウス（Ai14マウス）を交配することにより、Prx1発現細胞に由来する細胞がtdTomatoを恒久的に発現 するPrx1Cre;Ai14マウス（以下PAマウス）を作製した。PAマウスの鼠径部より脂肪組織を摘出し、免疫蛍光染色を行い共焦点レーザー顕微鏡にて観察したところ、全てのPerilipin陽性細胞はtdTomato陽性であり、Prx1発現細胞が脂肪前駆細胞であることが示された。また、tdTomato陽性CD34陽性CD31陰性細胞はCD31陽性の血管内皮細胞の近傍に存在しており、Prx1発現細胞はいわゆるPericyteであり、Prx1発現細胞がAdipose stem/stromal cells（ADSCs）と同一の集団であることが示され た。
続いて、PAマウスの鼠径部より採取した脂肪組織をコラゲナーゼにて分解し、遠心分離にて沈殿した間質細胞を初代培養 した。継代を進めるとほぼ全てtdTomato陽性CD34陽性CD31陰性細胞のADSCsのみとなった。このADSCsをWildマウスより採取した脂 肪細胞とともにWildマウスの背部皮下に移植し、4週間後に摘出・観察した。 生着した脂肪組織内の脂肪細胞や血管内皮細胞の一部はtdTomato陽性であり、脂肪移植の際にはADSCsによる脂肪細胞・血管内皮細胞 の再生が起きていることが明らかになった。
続いて　Tie2発現細胞特異的にCreを発現するTie2Creマウスと、Ai14マウスを交配することにより、Tie2発現細胞に由来する細胞がtdTomatoを恒久的に発現 するTie2Cre;Ai14マウス（以下TAマウス）を作製した。TAマウスにWildマウスより脂肪移植を行い、4週間後に摘出・観察した。移植脂肪組織内の瘢痕組織はtdTomato陽性であり、造血系細胞が線維化に寄与していることが明らかになった。