線維芽細胞の未分化性獲得の際のエピジェネティックス変化

2015 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K15656
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 貴志 和生 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (40224919)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2017-03-31
• Keywords: 皮膚 / 再生 / エピジェネティックス

Outline of Annual Research Achievements

2次元培養と非接着培養皿による細胞凝集塊のDNAメチル化の網羅的解析を行うためには、可及的に2者の細胞の条件を合わせる必要があるので、ヒト皮膚由来線維芽細胞を用いて、一部はSkps用培養液（DMEM/F-12+bFGF+EGF+B27)の無血清培地で2次元培養を、一部は１％の寒天でプラスティックディッシュをコーティングした非接着性培養皿に、Skps用培養液で浮遊させた線維芽細胞を播種し、細胞凝集塊を形成させた。それぞれの培養開始後、1週ごとに4週目まで細胞の一部を回収し、MTT assay,BrdU取り込み, TUNEL法,を使用して細胞死や増殖が停止する時期の決定を行った。細胞死と増殖が停止する時期を決めたのちに、それぞれの細胞を4％パラフォルムアルデヒドで細胞を固定し、一部はwhole mountで免疫染色を行い、一部はパラフィン包埋し、2 μｍの切片を作成し、これまで未分化マーカーとして報告されているさまざまな因子につき免疫染色を行った。これら因子につき、real time RTPCRを用いて、凝集塊総量の遺伝子発現の変化について定量的に観察した。また、ヒト間葉系幹細胞分化誘導試薬を用いて、脂肪、骨、軟骨への分化誘導効率を確認した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

計画書どおりに、おおむね順調に研究が推移している。

Strategy for Future Research Activity

平成２８年度の計画に則り、研究を遂行する。

Causes of Carryover

使用に際し、端数が生じました。

Expenditure Plan for Carryover Budget

研究用の油性ペンなどの購入に充てる予定です。