2015 Fiscal Year Research-status Report
腫瘍血管由来miRNAの同定とがん診断・治療への応用
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15K15726
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| Research Institution | Hokkaido University |
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Principal Investigator |
佐藤 和代 (栗林和代) 北海道大学, 大学病院, 助教 (70455674)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
間石 奈湖 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 助教 (00632423)
秋山 廣輔 北海道大学, 遺伝子病制御研究所, 客員研究員 (10609100)
大賀 則孝 北海道大学, 歯学研究科(研究院), 助教 (40548202)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | がん / 腫瘍血管 / miRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年，がん微小環境を構成する血管（腫瘍血管）は，がんの進展ならびに治療の経過と共にダイナミックに変化し，正常血管とは異なる多様な性質をもつことが知られている．本研究では，これらの腫瘍血管の異常性獲得メカニズムに関するmiRNAを同定し，がんの浸潤・転移との関連などを明らかにすることを目的としている．まず初めに，悪性度の異なる2種類のがん細胞をマウスに皮下移植し，形成された腫瘍塊からそれぞれ腫瘍血管内皮細胞を，磁気ビーズ細胞分離法ならびにフローサイトメトリーにより，CD31陽性CD45陰性細胞分画として分離した．分離・培養した腫瘍血管内皮細胞が，血管内皮マーカーが陽性で，かつ血球マーカーが陰性であることを，フローサイトメトリーおよびPCR法にて解析し，血管内皮細胞としての純度を確認した．その後，それらの分離培養した腫瘍血管内皮細胞からそれぞれmiRNAを抽出し，miRNAアレイにて網羅的発現解析を行った．次に，悪性度の異なる2種類のがん細胞のそれぞれの培養上清から，exosomeを超遠心法により回収した．回収したexosomeがexosomeマーカーCD63を発現していることをWestern blotting法で確認した．その後，これらのexosomeからmiRNAを抽出し，miRNAアレイにて網羅的発現解析を行った．現在，がん細胞由来exosomeを血管内皮細胞に処理することにより，miRNAの発現が亢進するかどうか，アレイで見出したいくつかのmiRNAについて検討を行っている．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
miRNAアレイにて網羅的な発現解析を行い，有望なmiRNAを比較検討している．
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| Strategy for Future Research Activity |
悪性度の異なるがん細胞由来exosomeに含まれるmiRNAの違いと，それぞれのがん組織由来の腫瘍血管内皮におけるmiRNA発現，ならびにそれらのmiRNAの標的分子について検討する．その後，これらの分子の発現変化が血管内皮細胞に及ぼす影響について検討する．さらに，着目したmiRNAががん由来exosomeにより運搬されるかどうか，in vivoで検討する．ヒト臨床検体を用いて，がんの悪性度や治療経過などの臨床病理学的因子とmiRNAの発現について検討する．
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| Causes of Carryover |
exosomeを処理した血管内皮細胞miRNA検討のに時間がかかっているため次年度に繰り越すことになった
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
フローサイトメトリー解析やmiRNAのPCRに必要な試薬や抗体に充てる予定である
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[Journal Article] Inhibition of multidrug transporter in tumor endothelial cells enhances antiangiogenic effects of low-dose metronomic paclitaxel2015
Author(s)
Akiyama K., Maishi N., Ohga N., Hida Y., Ohba Y., Alam Mohammad Towfik, Kawamoto T., Ohmura H., Yamada K., Torii C., Shindoh M. and Hida K
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Journal Title
The American Journal of Pathology
Volume: 185(2)
Pages: 572-580
DOI
Peer Reviewed / Open Access / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Differences in sequential posttreatment salivary IL-6 levels between patients with and patients without locoregional recurrences of oral squamous cell carcinoma: Part III of a cohort study.2015
Author(s)
Sato J., Ohuchi M., Wada M., Ohga N., Asaka T., Yoshikawa K., Miyakoshi M., Hata H., Satoh A., Kitagawa Y.
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Journal Title
Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology and Oral Radiology
Volume: 120(6)
Pages: 751-760
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Evaluation of the level of progression of extracapsular spread for cervical lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma.2015
Author(s)
Yamada S., Yanamoto S., Otani S., Hasegawa T., Miyakoshi M., Minamikawa T., Ohga N., Kamata T., Komori T., Kitagawa Y., Kurita H., Umeda M..
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Journal Title
International Journal of Oral and Maxillofacial Surgery
Volume: 45(2)
Pages: 141-146
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Dose escalation effectiveness and tolerability of paroxetine in patients with burning mouth syndrome and depressive conditions.2015
Author(s)
Ohga N., Yamazaki Y., Sato J., Hata H., Murata T., Sakata K., Inoue T., Kitagawa Y.
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Journal Title
Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology, and Endodontology
Volume: 27(3)
Pages: 402-406
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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