2016 Fiscal Year Annual Research Report
Structural Study of Influenza Virral NP and importin5 of Host Cell Factor.
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15K18499
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| Research Institution | Kanagawa Academy of Science and Technology |
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Principal Investigator |
吉田 尚史 公益財団法人神奈川科学技術アカデミー, 革新的インフルエンザウイルス創薬プロジェクト, 研究員 (90724774)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | インフルエンザウイルス / 核移行 / 宿主因子 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
インフルエンザウイルスは、効率的に宿主細胞に感染し、増殖するために細胞内の様々な機構を利用する。インフルエンザウイルスのRNAポリメラーゼとNPが、細胞内で様々な宿主因子と相互作用し、複合体を形成することで、ウイルスゲノムの複製と転写が可能となる。これら宿主因子の中でimportinファミリーは、細胞質で合成されたウイルスタンパク質の核移行に必須の宿主因子であり、NPはimportinαと結合することで核に移行する。本研究では構造生物学的手法を用いて、インフルエンザウイルスのNPがimportinαと結合し、どのように核移行するかを明らかにするために、タンパク質の大量調製および相互作用解析、結晶化条件の検討作業をおこなった。
NPとimportinα複合体のX線結晶構造解析に向けて、研究第1年度ではタンパク質の大量調製や物理化学的な手法による試料評価をおこなった。続いて、第2年度では調製した試料を用いて、結晶化スクリーニングを主におこなった。その結果、数条件において微小結晶を得ることができ、結晶化条件を最適化することで分解能約5オングストロームまでのX線回折反射点を確認することができた。
また、NPだけではなくその他のRNAポリメラーゼのサブユニットであるPB1についても、核輸送運搬をおこなうRanBP5との複合体共結晶化を実施した。NP-importinαと同様の方法でタンパク質を大量調製し、試料分析をおこなったの後に結晶化スクリーニングをおこなった。その結果、分解能約8オングストロームまでの反射点を確認することができた。今後、NP-importinαおよびPB1-RanBP5の結晶について、高分解能データを取得し複合体構造の解析をおこなっていく予定である。
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[Journal Article] G196 epitope tag system: a novel monocle antibody, G196, recognizes the small, soluble peptide DLVPR with high affinity2017
Author(s)
Tatsumi K, Sakashita G, Nariai Y, Okazaki K, Kato H, Obayashi E, Yoshida H, Sugiyama K, Park SY, Sekine J, Urano T
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Journal Title
Scientific Reports
Volume: 7
Pages: 43480
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Molecular Landscape of the Ribosome Pre-initiation Complex during mRNA Scanning: Structural Role for eIF3c and Its Control by eIF5.2017
Author(s)
Obayashi E, Luna RE, Nagata T, Martin-Marcos P, Hiraishi H, Singh CR, Erzberger JP, Zhang F, Arthanari H, Morris J, Pellarin R, Moore C, Harmon I, Papadopoulos E, Yoshida H, Nasr ML, Unzai S, Thompson B, Aube E, Hustak S, Stengel F, Dagraca E, Ananbandam A, Gao P, Urano T, Hinnebusch AG, Wagner G, Asano K
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Journal Title
Cell Reports
Volume: 18
Pages: 2651-2663
DOI
Peer Reviewed / Open Access
