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2015 Fiscal Year Research-status Report

薬理学的に重要なGPCRのシグナルバイアスの構造生物学的解析

Research Project

Project/Area Number 15K18843
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

幸福 裕  東京大学, 大学院薬学系研究科(薬学部), 特任助教 (80737940)

Project Period (FY) 2015-04-01 – 2017-03-31
Keywords構造生物学 / NMR / 膜タンパク質 / シグナル伝達 / GPCR
Outline of Annual Research Achievements

1.バイアスリガンドが結合したβ2アドレナリン受容体(β2AR)の構造解析
β2ARのメチオニンメチル基を選択的に13C標識し、その周囲を2H標識した上で、活性の異なる様々なリガンドが結合した状態でNMRスペクトルを測定した。Gタンパク質シグナルとアレスチンシグナルをともに活性化する通常のリガンドが結合した状態では、β2ARの細胞内側に位置するM215の化学シフトは、シグナル伝達活性に応じて直線的に変化した。一方で、アレスチンシグナルを選択的に流すバイアスリガンドが結合した状態では、M215の化学シフトは通常のリガンドとは異なる方向に変化した。このことは、β2ARの細胞内側が、複数の活性化構造を取り得ること、さらに、通常のリガンド結合状態とバイアスリガンド結合状態では、この複数の活性化構造の割合が異なることを示している。
2.バイアスリガンドが結合したμオピオイド受容体(μOR)の構造解析
β2ARと同様の方法を用いてμORのNMRスペクトルを測定した。通常のリガンドが結合した状態では、μORのM245に由来する2個のNMRシグナルが観測され、その量比がシグナル伝達活性に応じて変化した。一方で、Gタンパク質シグナルを選択的に流すバイアスリガンドが結合した状態では、同様に2個のシグナルが観測されたものの、その化学シフトが通常のリガンドと異なっていた。M245の化学シフトと、Gタンパク質・アレスチンシグナルの選択性の程度がよく相関していたことから、μORもβ2ARと同様に、複数の活性化構造を取り得ること、通常のリガンド結合状態とバイアスリガンド結合状態では、この複数の活性化構造の割合が異なることが明らかになった。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

1: Research has progressed more than it was originally planned.

Reason

当初の研究計画では、1年目でβ2ARの解析をおこなうとともに、μORの解析に着手し、2年目でμORの解析を完了して、両受容体の結果を合わせて考察する予定であったが、実際には、2年目に行う予定であったμORの解析も1年目に前倒しでおこなうことができた。このことから、当初の計画以上に研究が進展していると判断した。

Strategy for Future Research Activity

上述のように、当初の研究計画については、1年目に前倒しで完了したが、本研究をさらに発展させ、より詳細にシグナルバイアスが生じる機構を明らかにするために、2年目に実施する内容として、以下の項目を新たに設定した。
1.δオピオイド受容体(δOR)のNMR解析
δORはμORと膜貫通領域の相同性が高い一方で、リガンド非存在下のシグナル伝達活性(基礎活性)やGタンパク質の選択性は両者で異なっている。そこで、β2AR、μORに加えてδORでも同様の解析をおこない、GPCRに一般的なシグナル伝達機構を明らかにする。
2.アラニンをプローブとした空間分解能の向上
これまでは、メチオニンメチル基をプローブとして構造解析を進めてきたが、メチオニン残基はGPCRの膜貫通領域に10残基程度と少ないことから、構造変化をとらえる上で空間分解能が低いことが問題となっている。そこで、メチオニンに加えてアラニンメチル基もプローブとすることで、高い空間分解能で構造変化をとらえることを目指す。

  • Research Products

    (10 results)

All 2016 2015 Other

All Journal Article (3 results) (of which Peer Reviewed: 3 results,  Open Access: 3 results) Presentation (6 results) (of which Invited: 2 results) Remarks (1 results)

  • [Journal Article] Identification of a Conformational Equilibrium That Determines the Efficacy and Functional Selectivity of the μ-Opioid Receptor.2015

    • Author(s)
      Junya Okude, Takumi Ueda, Yutaka Kofuku, Motohiko Sato, Naoyuki Nobuyama, Keita Kondo, Yutaro Shiraishi, Takuya Mizumura, Kento Onishi, Mei Natsume, Masahiro Maeda, Hideki Tsujishita, Takefumi Kuranaga, Masayuki Inoue, Ichio Shimada
    • Journal Title

      Angewandte Chemie International Edition

      Volume: 21 Pages: 15771-15776

    • DOI

      10.1002/anie.201508794

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Elucidation of the CCR1- and CCR5-binding modes of MIP-1α by application of an NMR spectra reconstruction method to the transferred cross-saturation experiments.2015

    • Author(s)
      Chie Yoshiura, Takumi Ueda, Yutaka Kofuku, Masahiko Matsumoto, Junya Okude, Keita Kondo, Yutaro Shiraishi, Ichio Shimada
    • Journal Title

      Journal of Biomolecular NMR

      Volume: 63 Pages: 333-340

    • DOI

      10.1007/s10858-015-9992-x

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Development of a method for reconstruction of crowded NMR spectra from undersampled time-domain data.2015

    • Author(s)
      Takumi Ueda, Chie Yoshiura, Masahiko Matsumoto, Yutaka Kofuku, Junya Okude, Keita Kondo, Yutaro Shiraishi, Koh Takeuchi, Ichio Shimada
    • Journal Title

      Journal of Biomolecular NMR

      Volume: 62 Pages: 31-41

    • DOI

      10.1007/s10858-015-9908-9

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Presentation] δオピオイド受容体(δOR)の活性制御機構の解明2016

    • Author(s)
      佐藤 元彦、奥出 順也、延山 尚幸、上田 卓見、幸福 裕、倉永 健史、井上 将行、嶋田 一夫
    • Organizer
      日本薬学会第136年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-03-26 – 2016-03-29
  • [Presentation] SDF-1との二段階結合によるCXCR4のシグナル伝達機構の解明2016

    • Author(s)
      大西 健人、幸福 裕、塚本 宇信、鈴木 志歩、上田 卓見、嶋田 一夫
    • Organizer
      日本薬学会第136年会
    • Place of Presentation
      パシフィコ横浜(神奈川県横浜市)
    • Year and Date
      2016-03-26 – 2016-03-29
  • [Presentation] NMR法を用いた脂質二重膜中のGPCRの動的構造解析2015

    • Author(s)
      幸福 裕、上田 卓見、奥出 順也、白石 勇太郎、近藤 啓太、鈴木 志歩、嶋田 一夫
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学 角間キャンパス 自然科学本館(石川県金沢市)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
    • Invited
  • [Presentation] リガンドとの相互作用に伴う膜蛋白質の動的立体構造変化2015

    • Author(s)
      上田 卓見、幸福 裕、嶋田 一夫
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学 角間キャンパス 自然科学本館(石川県金沢市)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
    • Invited
  • [Presentation] 区分同位体標識を用いたβ2-アドレナリン受容体のリン酸化のNMR解析2015

    • Author(s)
      白石 勇太郎、幸福 裕、上田 卓見、夏目 芽衣、岩井 秀夫、嶋田 一夫
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学 角間キャンパス 自然科学本館(石川県金沢市)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
  • [Presentation] 脂質によるGPCRの活性制御機構の解明2015

    • Author(s)
      水村 拓也、近藤 啓太、上田 卓見、幸福 裕、嶋田 一夫
    • Organizer
      第53回日本生物物理学会年会
    • Place of Presentation
      金沢大学 角間キャンパス 自然科学本館(石川県金沢市)
    • Year and Date
      2015-09-13 – 2015-09-15
  • [Remarks] 東京大学大学院薬学系研究科生命物理化学教室ホームページ

    • URL

      http://ishimada.f.u-tokyo.ac.jp/public_html/index_j.html

URL: 

Published: 2017-01-06  

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