2016 Fiscal Year Annual Research Report
Elucidating the mechanisms underlying linear ubiquitin chains-mediated cell death protection
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15K19007
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
藤田 宏明 京都大学, 医学研究科, 助教 (90738006)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 細胞死 / 直鎖状ポリユビキチン鎖 / LUBAC |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者の所属研究室では新規のタンパク質翻訳後修飾である直鎖状ポリユビキチン鎖を特異的に生成するLUBACユビキチンリガーゼを同定し、LUBACがTNF-alpha下流でのNF-kappaBシグナル活性化に関与することを見いだしてきた。申請者はさらに、NF-kappaB活性化非依存的にTNF-alpha下流で惹起される細胞死をLUBACが顕著に抑制することを見いだした。LUBACは活性中心を有するHOIP、アクセサリー分子であるHOIL-1L、SHARPINの三者複合体から成る。本研究ではLUBACによる細胞死抑制機構を調べるために、LUBACを構成する全サブユニットを欠損した細胞をCRISPR/Cas9技術を用いて樹立した。LUBAC欠損細胞にレトロウイルス発現系を用いてLUBACの各種領域を欠損した変異体を導入し、細胞死制御に必須なLUBACの領域を同定した。ユビキチンリガーゼは基質にユビキチン鎖を付加することで、タンパク質の機能を制御するので、同定した領域に結合するタンパク質がLUBACによる細胞死制御機構を解明する上で重要だと考えられる。そこで野生型LUBAC、細胞死を抑制出来ない変異型LUBACを発現する細胞からLUBACを精製し、質量分析法により結合タンパク質を探索した。現在、同定されたタンパク質の評価と共に、LUBACの精製方法、質量分析法の条件をさらに検討している。また、細胞死制御に必須なLUBACの領域を同定する過程で、LUBAC自身の安定性に関与する新規メカニズムを発見し、現在論文作成中である。それに加え、LUBACによる抗細胞死効果を制御するメカニズムも発見し解析中である。
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[Journal Article] Crystal structure of the N-myristoylated lipopeptide-bound MHC class I complex2016
Author(s)
Morita, D., Yamamoto, Y., Mizutani, T., Ishikawa, T., Suzuki, J., Igarashi, T., Mori, N., Shiina, T., Inoko, H., Fujita, H., Iwai, K., Tanaka, Y., Mikami, B., and Sugita, M.
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Journal Title
Nat. Commun
Volume: 13
Pages: 10356
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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[Journal Article] Differential involvement of the NZF domains of SHARPIN and HOIL-1L in LUBAC-mediated cell death protection2016
Author(s)
Shimizu, S., Fujita, H., Sasaki, Y., Tsuruyama, T., Fukuda, K., and Iwai, K
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Journal Title
Mol. Cell. Biol.
Volume: 36
Pages: 1569-1583
DOI
Peer Reviewed / Acknowledgement Compliant
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