2017 Fiscal Year Annual Research Report
Expression mechanism of three CsrB family regulatory RNA in Vibrio alginolyticus
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15K19093
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| Research Institution | Okayama University |
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Principal Investigator |
後藤 和義 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (20626593)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 調節RNA / ビブリオ |
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| Outline of Annual Research Achievements |
ビブリオ・アルギノリティカスの３つのCsr調節RNA（CsrB, C, D）は、2成分制御系レスポンスレギュレーターVarAにより発現制御される。本研究では３つの調節RNAのうち１つはVarAにより正に、2つが負に制御される非冗長な新規メカニズムを明らかにすることを目指している。
昨年度までの研究で、VarAとCsrB, C, Dそれぞれのプロモーター領域のDNA断片のプロモーター活性には、差が認められなかったことから、プロモーター領域それ自体の差異で非冗長な発現が起こるわけではないと考えられた。一方、細菌の転写調節機構においてプロモーター領域のみならずORF領域の配列までもが転写活性に影響を及ぼす例がいくつか知られている。そこで、CsrB, C, Dのプロモーター領域から転写集結の直前までを用いてLacZレポーターアッセイを行った。その結果、プロモーター領域のみとORFを含む場合でCsrB, C, Dの間にLacZ活性の差は認められなかった。
これまで転写メカニズムを中心に研究を行ってきたが、非冗長メカニズムにつながるCsrB,C, D間の差異は見いだせなかった。そこでCsrB, C, Dが非冗長な転写後調節を受けている可能性について検討することとした。それぞれの転写後のRNA安定性を見積るため、リファンピシン・チェイス実験を行った。少なくとも本研究で行った条件では、リファンピシン添加後、CsrB, C, DのいずれのRNAにおいてもほとんど分解がみられず非常に安定であることが明らかとなった。
平成29年度では、CsrB, C, Dの安定性の差異がCsrAタンパクの結合量によりもたらされている可能性を検討するため、CsrAとCsrB, C, DのRNAとの親和性をRNAゲルシフトアッセイにより調べた。その結果、親和性の差は認められなかった。
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