2015 Fiscal Year Research-status Report
インフルエンザウイルスゲノムパッケージングにおけるPB2分節の役割
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15K19104
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
村上 晋 東京大学, 農学生命科学研究科, 助教 (10636757)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | インフルエンザウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
A型インフルエンザウイルスは8本に分節化されたマイナス鎖RNAをゲノムとして持つ。8本のゲノム分節は規則的な配置を取りウイルス粒子に取り込まれる。このとき重要な役割を持つのが、各ゲノム分節の5’および3’端に存在するパッケージングシグナル配列である。パッケージングシグナル領域を残して、残りの領域をGFP遺伝子と置き換えたPB2分節を持つウイルス（PB2-GFPウイルス）は、細胞内でPB2タンパク質を発現できないため増殖できないが、トランスでPB2タンパク質を供給すれば野生型のウイルスと同じくらい効率良く増殖出来る。8分節のうちのPB2分節を持たないPB2分節欠損７本鎖ウイルス(ΔPB2ウイルス)は、トランスでPB2タンパク質を供給しても、増殖性が非常に悪い。したがってPB2タンパク質だけではなくPB2分節そのものもウイルスの増殖に重要な役割を担っていると考えられるが、その分子機構については明らかになっていない。本研究では、野生型8 本鎖ウイルス、ΔPB2 ウイルス、および申請者が作出したゲノムパッケージング機能が部分的に回復した高増殖性ΔPB2 ウイルスを比較解析することで、PB2 分節のゲノムパッケージングにおける役割を明らかにする。本研究ではΔPB2ウイルスの増殖性を高めるNP-E375G変異に注目してインフルエンザウイルスの増殖におけるPB2分節の役割をより詳細に解析することを目的とする。ΔPB2ウイルスおよびΔPB2-HGウイルスRNP複合体に相互作用する宿主因子を共免疫沈降・質量分析によって同定する予定であるが、ΔPB2ウイルスの増殖性が低いため免疫沈降が効率よく出来ない。そこで今年度はその条件検討をした。今後免疫沈降および質量分析を実施する予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ΔPB2ウイルスおよびΔPB2-HGウイルスRNP複合体に相互作用する宿主因子を共免疫沈降・質量分析によって同定する予定であるが、ΔPB2ウイルスの増殖性が低いため免疫沈降が効率よく出来ない。そこで今年度はその条件検討をしたため、予定よりやや遅れた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は決定した条件に基づき、共免疫沈降および質量分析する。その後は探索した宿主因子をノックアウトあるいはノックダウンして、ウイルス増殖に関与する宿主因子を同定する。同定した因子についてはさらに性状解析を進め、ウイルスRNP複合体の局在への関与、ウイルスゲノムパッケージングにおける役割を明らかにする予定である。
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Research Products
(2 results)
