2016 Fiscal Year Annual Research Report
Functional analysis for apical transporters by gene silencing in isolated and cultured renal proximal tubules.
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15K19441
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
中村 元信 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (40459524)
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2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | 腎臓内科学 / 水電解質代謝学 / ナトリウム輸送 / エンドサイトーシス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
申請者は、新鮮単離近位尿細管（PT）および遺伝子発現調節した培養単離PTを用いて、申請者らが開発したsplit open法により、野生型マウス、ラット、およびヒトのPT管腔側Na依存性酸塩基輸送能を推定した。
まず、Ang２のヒトPT管腔側の、Na-H交換輸送体(NHE)全活性に対しては、ヒト近位尿細管特異的な濃度依存性の一相性刺激作用を確認した。
次に、NHE阻害剤であるEIPA 0.1mMの添加によるPT管腔側Na依存性酸塩基輸送能活性を測定したところ、マウス、ラットでは30％程度の抑制効果を認めたが、ヒトではほとんど抑制効果を認めなかった。次に、マウスPTによる遺伝子発現調節実験を行った。NHE3またはNHE8に対する特異的siRNAを導入した遺伝子発現調節単離PTでは、残存する管腔側Na依存性酸塩基輸送能活性は、EIPAと同程度の抑制効果であった。このことから、PT管腔側には、EIPA感受性以外の他のコンポーネントの存在が示唆された。
そのため、重炭酸/陰イオン輸送体阻害剤であるDIDS 0.5mMの添加によるPT管腔側Na依存性酸塩基輸送能を測定したところ、マウス、ラット，ヒトの管腔側反応は50%程度の抑制効果を認めた。さらい、EIPAとDIDSの同時添加によるPT管腔側Na依存性酸塩基輸送能を測定したところ、管腔側Na依存性酸塩基輸送能活性は、マウス、ラット、ヒトにおいて大部分が抑制されていた。
以上より、PT管腔側にはEIPAに加えてDIDS感受性のコンポーネントが存在する可能性を見出し、さらにその比率には種差がある可能性を明らかにした。
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