2015 Fiscal Year Research-status Report
| Project/Area Number |
15K19452
|
|---|
| Research Institution | Shiga University of Medical Science |
|---|
Principal Investigator |
武田 尚子 滋賀医科大学, 医学部, 客員助教 (20737655)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | 沈着腎症 / 蛋白質同定 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
糸球体疾患の診断は腎生検による組織診断がゴールドスタンダードだが、現在も既知の疾患に分類できない症例が存在する。われわれの施設において、蛋白尿にて腎生検を施行し糸球体基底膜に沈着物をみとめる、いわゆる沈着腎症を経験した。本例は、これまで多くの施設にて精査を行った結果、既知の疾患に分類されなかった。また、本例は同一家系内に同様の病態を有していることより、何らか遺伝子異常に起因して糸球体への沈着を生じている可能性が高いと考えられた。そこで、レーザーマイクロダイセクションにより糸球体を分離しLC-MS/MSによる解析を行い、病因蛋白質を同定することとした。
まず、予定の手技にて構成蛋白質の同定が可能か、アミロイドーシス検体、正常糸球体検体を用い、予備検討を行った。対象検体と近い条件で施行され、対照となりえる検体を選定し、対象患者よりそれぞれ同意を得た後に検討を行った。
上記2検体からレーザーマイクロダイセクションにより糸球体を分離し、蛋白質解析を行った。その結果、2検体からそれぞれ2.12mm2、1.67mm2の試料を回収することが可能であった。これらは通常解析に用いる試料量の20%相当ではあったが、38種類、47種類の蛋白質が同定可能であった。これらの内容を解析し、本症例においても解析が可能と考え、引き続き同様の手順にて解析を継続していく予定としている。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
本年度中に対象検体の蛋白質同定を終了している予定であったが、予備検討の終了のみとなっている。同様の手技にて対象検体の同定は可能であり、次年度継続していく。
|
| Strategy for Future Research Activity |
対象検体を用い、レーザーマイクロダイセクションにより糸球体を分離し、蛋白質解析を行い、候補蛋白質を絞り込む。絞り込んだ候補蛋白質それぞれに対して本疾患との関連を検討し、沈着をおこしうるか検討を行う。絞り込んだ病原候補蛋白質に対する抗体を作製し、沈着腎症、他の沈着物を認める糸球体疾患、正常糸球体の腎生検検体をそれぞれ免疫染色し、沈着物に対する染色性を検討し、沈着腎症の原因物質を同定する。同定した蛋白質が本疾患に特異的な染色を示すか他の疾患に対する免疫染色を施行し検討する。病因蛋白質が明らかになった時点で再度実験計画を立案し、倫理委員会の承認を得、患者の同意を得たのち、患者検体から病因遺伝子のクローニングを行っていく。
|
| Causes of Carryover |
実験が計画通りに進行しておらず、また、本年は旅費を使用しなかったため残額が生じた。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
本年の残額は次年度に物品費として使用する予定である。
|
