2017 Fiscal Year Annual Research Report
Investigation of down regulation mechanism of Lect2 gene expression by metformin
Project/Area Number |
15K19509
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Research Institution | Kanazawa University |
Principal Investigator |
高山 浩昭 金沢大学, 医学系, 技術職員 (90725227)
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Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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Keywords | LECT2 / メトホルミン / AMPK / PKA |
Outline of Annual Research Achievements |
メトホルミンによる肝Lect2発現抑制について、前年度はマウス初代培養肝細胞を用いてAMPKまたはPKAのノックダウン実験を行ったが、ノックダウン効率が安定せず結果の再現性を得ることが難しかった。そこで本年度はマウス培養肝細胞AML12細胞を用いてノックダウン実験を行った。その結果、AMPKノックダウンでのみメトホルミンによるLect2遺伝子発現抑制が消失した。この結果は、メトホルミンはAMPK依存的にLect2遺伝子発現を抑制することを示唆する。 前年度までにヒトLect2遺伝子上流4.2kbの範囲にメトホルミン応答領域が損じしないことを確認している。今回は、ゲノムデータベースサーチにより発見した予想転写結合領域をリッチに含Lect2遺伝子上流約15kbの領域を、ルシフェラーゼレポーターベクターにクローニングし、メトホルミンに対する応答性を検討した。その結果、この領域はメトホルミン処置によってむしろ転写活性が亢進した。 これまでにLect2はWnt/βカテニンシグナルによって遺伝子発現が正に制御されることが知られている。またメトホルミンはβカテニンを負に制御することが知られている。そこでメトホルミンによるLect2遺伝子発現抑制にWnt/βカテニンシグナルが関与するかどうか検討した。その結果、既報の通りWntタンパクはLect2遺伝子発現を亢進したが、メトホルミンの作用を解除できなかった。このことはメトホルミンによるLECT2遺伝子発現抑制はWnt/βカテニンシグナルとは独立していることを示唆する。 本研究期間を通じて、メトホルミンがAMPKを介してLect2遺伝子発現を抑制することを示したが、より詳細な制御機構の解明にはさらなる検討を要する。
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