2015 Fiscal Year Research-status Report
胃癌微小環境における脂肪由来幹細胞の機能解析と間質線維化制御への応用
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15K19876
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| Research Institution | Kanazawa University |
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Principal Investigator |
木下 淳 金沢大学, 医学系, 協力研究員 (90584855)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 胃癌 / 脂肪由来間葉系幹細胞 / 間質線維化 / 微小環境 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
脂肪由来間葉系幹細胞(ADSC)は、間葉系幹細胞 (MSC)と同様にがん細胞との応答に
より腫瘍関連線維芽細胞(Cancer Associated Fibroblastoma: CAF) の起源細胞であると想定されているが、胃癌細胞とADSCとの細胞間相互作用に関しては不明な点が多い。
本年度は、まず、ヒト大網の脂肪組織よりADSCを分離継代し、胃癌細胞の増殖能に与える影響及びin vivoにおける造腫瘍能と線維化に与える影響に関して検討を行った。
まず、ヒト大網の脂肪組織より間質細胞群の分離を行い、培養後に細胞表面マーカー(CD22,44,90,105+/14,31,34,45-)をFACSにて解析し、ADSCのpurityを確認した。分離培養したADSCが胃癌細胞の増殖能に与える影響をMTT assayにて検討した所、非接触共培養にて増殖促進効果を認めた。さらにヌードマウス皮下に胃癌細胞とADSCを5×106個共接種し、腫瘍径を経時的に評価した結果、胃癌細胞単独接種に比較し、造腫瘍能の亢進が確認された。また、ADSCを共接種した皮下腫瘍組織では、腫瘍内の間質線維化と共に、E-cadherinの発現が減弱し、αSMAの発現が亢進している事が免疫組織学的に確認された。しかしながら、ADSC単独接種では皮下腫瘍の形成は確認できなかった。
以上の結果から、ADSCは胃癌細胞の増殖能を促進し、胃癌間質の線維化を上皮間葉転換(EMT)を誘導することにより亢進する事が示唆された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度の検討項目は概ね順調に実施している。ADSCが胃癌細胞の増殖能に与える影響に関しては、MKN45の他に数種の胃癌細胞株を追加して検討を行う予定である。直接共培養下の増殖能の変化をMKN-45-Luc cellを用い、Luciferase assayにて追加検討予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
次年度以降の実験計画は一部予定を変更する。つまり、当初はADSCは抗線維化作用を有すると想定していたが、本年度の実験結果からは、癌間質の線維化にpromoterとして作用するCAFとしての機能を有すると考えられた。このため、平成28年度は下記に示す如く概ね当初の予定通りの実験を実施するが、次々年度(平成29年度)は、癌細胞とADSCとの細胞間相互作用を司るsoluble mediatorをchemokine array analysis等を用い、そのシグナル解析を行うと共に、当該シグナルの阻害剤等を用い、ADSCに対する線維化阻害作用を評価する。
次年度(平成28年度)の研究計画
① ADSCが胃癌細胞株の腫瘍形成に与える影響
胃癌細胞株とADSCを直接共培養し、sphere formation assayにてspheroid形成を評価しstemness marker、アポトーシス関連蛋白の発現状況を評価する。in vivoにおける造腫瘍能の評価をヌードマウスの腹膜播種モデルにおいても評価する。
② 担癌ヌードマウスにおけるADSCの腫瘍集積性に関する検討
GFP or ルシフェラーゼ標識ADSCを調製し、マウス腹膜播種モデルに,標識ADSCを全身投与(左心室内1×106個)し、72時間後xenograftを摘出し、ADSCの腫瘍組織へのホーミング能を検証する。
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| Causes of Carryover |
本年度実験に使用したADSCの分離・継代に消費する試薬やflow cytometry抗体の価格が、計画当初より安価で購入できたため、次年度使用額が生じた。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
次年度は、ADSCの分離・継代に必要な試薬の追加購入に加え、消耗品の価格さらに高額となるため、この繰り越し金を使用する予定である。
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Research Products
(1 results)
