2016 Fiscal Year Research-status Report
食道癌における分子標的治療薬の開発を目指したlincRNAの網羅的機能解析
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15K19912
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| Research Institution | Nippon Medical School |
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Principal Investigator |
赤城 一郎 日本医科大学, 大学院医学研究科, 研究生 (90552662)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | miRNA |
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| Outline of Annual Research Achievements |
我々は過去の研究においてmiR-141、miR-200b、miR-200c、miR-205の発現が食道扁平上皮癌細胞株において有意に高値であることを明らかにした。さらにPI3K-Akt-mTOR経路を阻害し、かつTargetScanデータベースにおいて前述のmiRNAの標的となる可能性を持つものを選抜した結果、miR-200bおよびmiR-200cの標的候補としてDNA damage-inducible transcript 4 protein（DDIT4）を、miR-141の標的候補としてPH Domain Leucine-Rich Repeat-Containing Protein Phosphatase 2（PHLPP2）を見出した。またDDIT4、PHLPP2の発現が食道扁平上皮癌細胞株上で有意に低下していることも明らかにした。
miRNA強制発現によるDDIT4およびPHLPP2発現への影響を評価するため、正常食道扁平上皮株（Het-1a）にmiRNAを強制発現させ標的候補遺伝子の発現量をRT-PCRにより定量した。Het-1aに対するmiR-141の強制発現によりPHLPP2の発現がmRNA、タンパク質レベルで低下した。この結果がmiR-200bおよびmiR-200cの強制発現によるDDIT4の発現抑制と比べて大きいことから、PHLPP2発現とmiR-141発現との関係に研究対象を絞って詳細に調査することにした。さらに解析を進めるべくルシフェラーゼアッセイを進めるもhPHLPP2の3’UTRが長く、配列にも独自性が強いためクローニングに困難を極めた。現状、クローニングは成功しておらず実験系の見直しをしている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
実験系が確立出来ていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
実験系の見直し
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| Causes of Carryover |
実験試薬が余っていたため
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
抗体などの購入をする
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