2016 Fiscal Year Annual Research Report
Analysis of extracellular microRNA having protective effects against ischemia-perfusion injury of organs after ischemic preconditioning
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15K19921
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
上野 耕司 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (30736070)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | microRNA / 虚血プレコンディショニング |
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| Outline of Annual Research Achievements |
虚血プレコンディショニング(Ischemic preconditioning : IPC)として、C57BL/6マウスの腹部大動脈をtapingし、IPCは腹部大動脈遮断による5分間虚血と5分間灌流を3サイクル行った。対照群として開腹したマウスをShamとした。IPCをして24時間後のマウス5匹の血漿中の平均VEGFの濃度は41pg/ml、Shamマウス5匹の平均VEGF濃度は34pg/mlであった(p = 0.0408)が、IPCをして48時間後と72時間後における血漿中のVEGF濃度は、sham群における血漿中のVEGF濃度と差はなかった。
IPCをして24時間後の血漿中のエクソソームに含まれるmicroRNAを抽出し、microRNA microarray解析を実施したところ、IPC群においてSham群よりも発現レベルが0.3以下になったmicroRNAが8つ(miR-149-3p、miR-711、miR-762、miR-2137、miR-3072-5p、miR-3960、miR-5112、miR-6366)あり、その8つの中で3つ（miR-711、miR-762、miR-3072-5p）のmicroRNAはVEGFの3’UTRに結合する可能性がバイオインフォマティクス解析により示唆された。IPCをして24時間後のCD34陽性骨髄細胞とsham群のCD34陽性骨髄細胞において、VEGFを抑制する可能性のある3つ（miR-711、miR-762、miR-3072-5p）のmicroRNAの発現レベルを解析すると、IPCをして24時間後のCD34陽性骨髄細胞において2つのmicroRNA（miR-762、miR-3072-5p）は、sham群のCD34陽性骨髄細胞よりも優位に低下した。
CD34陽性骨髄細胞にmiR-762とmiR-3072-5pのinhibitorをCD34陽性骨髄細胞に導入して24時間後の培養上清中のVEGFを測定したところ、CD34陽性骨髄細胞の培養上清中のVEGF濃度は、コントロールでは6.9 pg/mlであったが、miR-762とmiR-3072-5pのinhibitorを導入したCD34陽性骨髄細胞の培養上清中のVEGF濃度は、12.6 pg/mlと12.5 pg/mlであり、CD34陽性骨髄細胞のmiR-762とmiR-3072-5pをノックダウンすると、VEGFの分泌量が高い結果が得られた。
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