2018 Fiscal Year Annual Research Report
Epigenetic molecular mechanism of CDX2 using differentiation-induced placental trophoblast cells
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15K20121
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| Research Institution | Tohoku University |
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Principal Investigator |
北村 茜 東北大学, 医学系研究科, 技術補佐員 (50736402)
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| Project Period (FY) |
2016-04-01 – 2019-03-31
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| Keywords | ヒト胎盤発生 / CDX2 / エピジェネティクス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（1）ヒト胎盤栄養膜細胞でのCDX2遺伝子の分子機構の解明：
初期CT細胞とTS細胞のCDX2の発現量について検討した結果、ES細胞と同様の発現量であることが判明した。次に、2種類のヒトTS細胞を用いて、CDX2遺伝子プロモーター領域のDNAメチル化とヒストン修飾について解析を行なった。DNAメチル化の解析はBisulphite-PCR法で、ヒストン修飾の解析では、活性型修飾の解析には、抗ヒストンH3-K9 とH3-K14のアセチル化および抗H3-K4のジメチル化抗体を利用した。一方、不活化型には抗ヒストンH3-K9ジメチル化および抗H3-K27のトリメチル化抗体を利用した。それぞれ免疫沈降後、PCRによりヒストン修飾の有無について解析した。その結果、CDX2遺伝子のプロモーター領域（320bp）は、高メチル化状態であることが明らかとなった。同様に、ヒストン修飾も不活性型で有意な変化を認めた。一方ES細胞でも、高メチル化状態を維持していることが判明した。この結果はメチル化阻害剤を添加して、再確認した。これらの結果より、マウスとは異なり、ES とTSの分化維持過程には、CDX2遺伝子の転写活性が作用しない事が示唆された。
（2）未分化栄養膜細胞株を用いたCDX2遺伝子の機能解析と分子間相互作用：
一過性に遺伝子発現を抑制するCDX2遺伝子のノックダウン（KD）TS細胞（3株）を用いて、未分化TSマーカー遺伝子 (ELF5, GATA3) の発現解析を行なった。その結果、いずれも発現量に有意な差を認めなかった。両遺伝子のプロモーター領域について、メチル化の解析を行ったところ、TS細胞に比べ高メチル化状態を示した（平均値：78.2%）。ノックダウン効率は約40%であったが、細胞形態に大きな変化はみられなかった。
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[Journal Article] The risk of secondary sex ratio imbalance and increased monozygotic twinning 1 after blastocyst transfer: data from The Japan Environment and Children’s Study.2019
Author(s)
Hattori H, Kitamura A, Takahashi F, Kobayashi N, Sato A, Miyauchi N, Nishigori H, Mizuno S, Sakurai K, Ishikuro M, Obara T, Tatsuta N, Nishijima I, Fujiwara I, Kuriyama S, Metoki H, Yaegashi N, Nakai K, Arima T, Japan Environment Children;s Study Group.
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Journal Title
Reproductive Biology and Endocrinology
Volume: 17
Pages: 27
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Association of four imprinting disorders and ART.2019
Author(s)
Hattori H, Hiura H, Kitamura A, Miyauchi N, Kobayashi N, Takahashi S, Okae H, Kyono K, Kagami M, Ogata T, Arima T.
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Journal Title
Clinical Epigenetics
Volume: 11
Pages: 21
Peer Reviewed / Open Access
