2016 Fiscal Year Research-status Report
角化重層扁平上皮－線維芽細胞クロストークを介した真珠腫骨破壊メカニズムの解明
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15K20204
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
岩本 依子 大阪大学, 医学系研究科, 特任研究員 (70636480)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
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| Keywords | 角化扁平上皮細胞 / 線維芽細胞 / プロスタグランジンE2 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
平成２７年度には、真珠腫の構成細胞である角化重層扁平上皮細胞と線維芽細胞をマウス耳介から単離を行い、これら二者の細胞を用いて、in vivo/in vitroで、それぞれ真珠腫を模した組織を構築することに成功した。更には、この二種に細胞からなる腫瘤が生体内にて破骨細胞分化を誘導しうることを見出した。また、角化扁平重層細胞と共培養した繊維芽細胞ではRANKL（破骨細胞分化調節因子）発現の上昇が見られることを確認した。これらから、角化扁平重層扁平上皮細胞から分泌される何らかの液性因子が線維芽細胞に作用し、RANKL発現を上昇させ、破骨細胞分化を誘導することが想定された。
そこで、２８年度はこの角化重層扁平上皮から分泌され、線維芽細胞のRANKL発現増強に寄与する液性因子の同定を研究課題とした。当初、液体クロマトグラフィーを用いて同定予定であったが、解析に必要な十分量の蛋白が得られず、また培養上清への不純物の混入が多かったため解析は困難と判断した。
そこで、前年度に確認を行ったプロスタグランジンE2がマウス耳介由来線維芽細胞に作用し、RANKL発現を増強する効果を持つ事に着目し、プロスタグランジンE2の骨破壊への関与について検証を行った。まず、マウス線維芽細胞における受容体（EP4）発現の確認を行った。また、ヒト真珠腫臨床検体において、真珠腫が接する骨上での破骨細胞が高率に存在することを確認できたことからヒト真珠腫においても破骨細胞が骨破壊に関与している可能性を示した。そこで、ヒト真珠腫のperimatrix層におけるプロスタグランジン受容体発現を免疫染色にて確認したところ、コントロールであるヒト皮膚の真皮層に比較し発現が増強していることが確認された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
研究実績概要に示したように、角化上皮細胞から分泌されるRANKL発現増強因子の同定にあたって、計画変更を余儀なくされたため、当初の予定から遅延が生じた。
同定にあたって、網羅的解析を一旦断念し、既知の情報からの整合性の検証を進めることとした。既に骨芽細胞でRANKL発現との関連が報告されており、前年度に自らもマウス耳介線維芽細胞におけるRANKL発現増強効果を確認していたプロスタグランジンE2に着目することで、これまでの結果に合致する結果を得られつつあるが、今後更なる整合性の検証を要する。
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| Strategy for Future Research Activity |
プロスタグランジンE2の臨床検体における骨破壊との関連を実証するために、真珠腫matrixからのプロスタグランジンE2分泌の確認を行う必要がある。ELISAを用いて検証予定である。また、真珠腫検体におけるRANKL発現については、これまでの報告でも議論の別れるところであり、免疫染色による自験でもRANKL発現部位については一定の結果を示していない。in situ hybridizationなど他の手法も用いて検証をする予定である。
これらから、プロスタグランジンE2の分泌から、線維芽細胞におけるRANKL発現、破骨細胞分化誘導、骨破壊という流れを実証する予定としている。
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| Causes of Carryover |
当初予定していた液体クロマトグラフィーを用いた実験を中止し、計画変更したため、次年度使用額が発生した。
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| Expenditure Plan for Carryover Budget |
プロスタグランジンE2やRANKL発現について、in situ hybridization や免疫染色による解析を予定しており、必要となる抗体の購入費用や、研究成果の発表に関わる費用に計上する予定としている。
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