ホールマウント標本による末梢神経再生の観察

2017 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 15K20308
• Research Institution: Niigata University
• Principal Investigator: 親松 宏 新潟大学, 医歯学総合病院, 特任助教 (70748607)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2019-03-31
• Keywords: 末梢神経再生

Outline of Annual Research Achievements

末梢神経再生が起こったときの軸索伸長の変化の様子を形態学的に観察することを目標に実験開始した。
平成27年度は末梢神経損傷モデルを用いて抗ニューロフィラメント抗体で免疫染色し、バックグラウンドを極力排除したホーいるマウント標本を作成する作成することを目標とした。その後、抗リン酸化GAP－43抗体でも同時に免疫染色を行い、ホールマウント標本を作成することを目指した。
ラットを灌流固定した後に前肢の神経を採取し、さらに後固定を行い、抗ニューロフィラメント抗体で免疫染色を行い、DAB発色させた。軸索を抗体で検出することは十分可能であったが、同時にバックグラウンドが非常に強く出てしまい、標本全体がDABに染まり十分な観察ができない状況であった。各種工程・条件を再確認しながら試行錯誤するもやはりバックグラウンドの問題が克服できない状態であった。その為27年度は透徹する段階まで計画していたが達成できなかった。
28年度は各条件の再検討を行ったが、やはり進展しなかった。透徹方法に関してはこれまでグリセリンによる末梢神経の透徹方法を当研究室では行ってきたが、市販の透徹用キットを用いることとした。
29年度は、諸般の理由により実験遂行が困難であり、免疫染色時のバックグラウンドの問題、標本透徹の段階まで行えていない状況である。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

神経ホールマウントモデルの免疫染色を行ったが、バックグラウンド非常に強く出てしまい、検出したい部分との判別が困難な状態となった。各種条件・工程を再検討したが十分な結果が得られなかった。その為次の段階に進むことができていない状況である。

Strategy for Future Research Activity

今後も同様に実験を進める予定である。

Causes of Carryover

実験が当初の予定通り進行しなかったため、必要機器・消耗品を必要としなかったため。
実験を進め、必要物品に充当する予定である。