microRNAを用いた術後心房細動発症機序の解明と早期診断バイオマーカーの開発

2015 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 15K20350
• Research Institution: Kyoto Prefectural University of Medicine
• Principal Investigator: 谷口 文香 京都府立医科大学, 医学部附属病院, 専攻医 (40515285)
• Project Period (FY): 2015-04-01 – 2016-03-31
• Keywords: micro RNA / 心房細動

Outline of Annual Research Achievements

本年度は、人工心肺予定手術患者の人工心肺前後の血液・尿中（可能であれば右心耳）からエクソソームを抽出し、microRNA発現の網羅的解析を行うことを主眼にして研究を行った。具体的は、麻酔導入直後、人工心肺中・離脱直後・手術終了時・８時間後・２４時間後で採血・採尿を行い、超遠心法及びエクソソーム単離キットを用いて、エクソソームの分離を行った。その後、バイオアナライザーを用いて、サンプルからmiRNA群が抽出されていることを確認後、small RNAのライブラリ作成（Ion total RNA-seq kitを用いたフラグメント化）し、cDNAに変換を行った。さらにエマルジョンPCR法を用いて、cDNAを増幅させ、シーケンシングに持ち込んだ。解析には、CLCバイオ社のGenomic Work Benchを使用した。現在のところ、サンプル数の問題で、有意差を認めるには至っていないが、可能性のあるmicroRNAがいくつか候補に挙がっている。