2016 Fiscal Year Research-status Report
骨髄細胞の機能を介した局所の破骨細胞分化制御機構の探索
| Project/Area Number |
15K20431
|
|---|
| Research Institution | Niigata University |
|---|
Principal Investigator |
長澤 麻沙子 新潟大学, 医歯学系, 助教 (40612239)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2018-03-31
|
| Keywords | 破骨細胞 / 骨髄細胞 / 表面性状 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
平成28年度は前年度に引き続きBone Marrow Stromal Cells(BMSCs)を介した破骨細胞の分化制御の検索を行い、実験結果をより確実なものとするべく実験を行った。６週齢ウィスター系ラットのより採取した骨髄細胞を24時間培養した後、非接着性細胞を取り除き、接着性細胞を一定期間培養した。これをBMSCｓとし、１～２回継代した後に培養上澄み液を回収しておいた。同じく６週齢ウィスター系ラットのより採取した骨髄細胞を24時間培養した後、非接着性細胞を回収し、これをBone Marrow-derived Macrophage（BMM）とした。BMMはBMSCｓの培養上澄み液およびsoluble-RANKL, M-CSFと一定期間培養を行った。その結果、異なる刺激・環境下におけるBMSCs 培養が間接的に破骨細胞の分化に影響を及ぼすことがわかった。例えば表面性状の異なる3種類（machined, micro, nano）の純チタンプレートおよびtissue culture plasticに播種した場合、Microとnanoの表面性状のチタン上で培養した骨髄間質細胞では遺伝子発現の解析を行った際にTNF-α( Tumor Necrosis Factor α)とM-CSF（macrophage colony-stimulating factor）の発現増加がみられ、その上澄み液により培養された破骨細胞にも変化が認められた。このことから純チタンの表面性状の違いは骨髄間質細胞のphenotypeを変化させ、間接的に破骨細胞の増殖・分化に影響を与えることが明らかとなった。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
前年度の結果を踏まえ、繰り返し実験を行うことでその結果に確証を持つことが出来、さらに当初の予定であったｑPCR法にて遺伝子の解析を行うことができた。この結果はすでに得られている結果を裏付けるものであった。
|
| Strategy for Future Research Activity |
引き続きBMSCs における蛋白の遺伝子発現をreal-time PCR 法によって検索する。まずはM-CSF,RANKL,OPG,TNF-α の４因子に着目し、BMSCs が産生し、間接的に破骨細胞の分化に影響を与える因子を同定するための解析を行う。
|
| Causes of Carryover |
2016年度の収支としては未使用額は大きいが年度末（3月）に使用した金額はここに反映しておらず、これを反映するとほぼ予定通りである。
|
| Expenditure Plan for Carryover Budget |
物品購入などの納品検収は当該年度に完了し、4月に支払いは完了している。今後の動物実験やこれにかかわる消耗品およびタンパクの遺伝子発現解析等に使用する予定である。
|
