2016 Fiscal Year Annual Research Report
High-throughput analysis of olfactory receptor repertoire by using the automated single-cell analysis and isolation system
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15K21068
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
良元 伸男 大阪大学, 産業科学研究所, 特任准教授 (80467612)
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| Project Period (FY) |
2015-04-01 – 2017-03-31
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| Keywords | １細胞解析 / 嗅覚細胞 / 嗅覚受容体 / 匂い分子 / 嗅覚受容体レパトア / バイオセンサー / 全自動１細胞解析単離装置 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では全自動1細胞解析単離装置を用いたタイムラプス解析向けに、特に１）細胞への侵襲性の検定、２）新灌流系を用いた新たな匂い分子のORスクリーニング、３）目的細胞検出の更なる高感度化を行った。１）CHO細胞をモデルに用いて１細胞からの増殖試験を行った。詳細には抗体分泌CHO細胞１個が分泌する抗体を個々の細胞周辺に非侵襲的に固定化してFIA方式で定量検出する系（CS-FIA、木田ら、Anal. Chem. 85, 1753-9（2013））を用い、全自動１細胞解析単離装置を用いて陽性細胞を１細胞ずつ単離して増殖させた。結果、45個の細胞から37個（82%）の増殖が確認できた。これにより嗅覚細胞への低侵襲性が示唆され、ORスクリーニング成功率の１つの要素となると考えられた。２）新作の解析エリアを広げたORスクリーニングを実施した。匂い分子に加齢臭の成分であるnonenal（30、300 μM）を用いて嗅細胞群を刺激した。アッセイした約10,000細胞の内nonenalに反応した細胞は71個（nonenal 両濃度でのアッセイ総計）と検出され、内反応の良い細胞11個を回収し１細胞RT-PCRに供した。３個についてPCRに成功し、解析の結果OlfR156、262、877が同定された。３）新しい低バックグラウンドのマイクロチャンバーアレイチップを開発するべく、基板（ガラス、テンパックス、石英）上にSU8光硬化樹脂を塗布し、18 ~ 20 μmの深さでウェルをパターンニングした。全自動１細胞解析単離装置を用いて5、50、100 msecの露光時間で樹脂を塗布した基板の自家蛍光を観察したところ、いずれもRFU（0 ~ 255）< 10を示し、現行のPSスライド（RFU = 30程度）より低い値を示した。これは新作チップの方が低バックグラウンドであり、相対的に感度が改善されることを示す。
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Research Products
(12 results)
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[Journal Article] Cellular uptake of hepatitis B virus envelope L particles is independent of sodium taurocholate cotransporting polypeptide, but dependent on heparan sulfate proteoglycan2016
Author(s)
Masaharu Somiya, Qiushi Liu, Nobuo Yoshimoto, Masumi Iijima, Kenji Tatematsu, Tadashi Nakai, Toshihide Okajima, Kazuyuki Kuroki, Keiji Ueda, Shun’ichi Kuroda
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Journal Title
Virology
Volume: 497
Pages: 23-32
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Mutational analysis of hepatitis B virus pre-S1 (9-24) fusogenic peptide2016
Author(s)
Qiushi Liu, Masaharu Somiya, Naohiko Shimada, Wakako Sakamoto, Nobuo Yoshimoto, Masumi Iijima, Kenji Tatematsu, Tadashi Nakai, Toshihide Okajima, Atsushi Maruyama, Shun'ichi Kuroda
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Journal Title
Biochemical and Biophysical Research Communications
Volume: 474
Pages: 406-412
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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