Toll様受容体を介したプライミング効果による脂質メディエーター産生増強機構

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16017225
• Research Institution: The University of Tokyo
• Principal Investigator: 石井 聡 東京大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (10300815)
• Keywords: 血小板活性化因子 / PAF / アセチルCoA:リゾPAFアセチル転移酵素 / プライミング / TLR4 / MyD88 / TRIF

Research Abstract

アセチルCoA:リゾPAFアセチル転移酵素(リゾPAF-AT)は、血小板活性化因子(PAF)の産生にとって重要な生成反応を触媒する。腹腔マクロファージにおいて、この酵素はLPSによってプライミングされる。すなわちPAFで細胞を刺激してこの酵素の活性を上昇させるとき、LPSで前処理しておくと酵素活性の上昇がさらに増大する。申請者はこのプライミング効果がTLR4依存的かつMyD88非依存的に起きることを既に明らかにしているが、さらなる分子機構の解析を進めるために今年度は以下の実験を行った。
大阪大学審良教授より供与していただいたTRIF-KOマウスの腹腔マクロファージを用いた実験から、LPSのプライミング効果はTRIF非依存的に起きることが明らかになった。野生型マウスの腹腔マクロファージを用いた実験でIFNβはLPSの代わりにプライミング効果を惹起することはできず、また抗IFNβ抗体はLPSのプライミング効果を抑制できなかった。これらの結果はプライミング効果がTRIF非依存的現象であることを支持している。一方、シクロヘキシミド処理によりプライミング効果は大きく減弱したことからde novoのタンパク質合成の関与が示唆された。
上記のアプローチとは別に、リゾPAF-ATに対するLPSプライミング機構をこの酵素の部分アミノ酸配列を決定し、cDNAクローニングすることによって明らかにしようとする試みも行っている。ブタ脾臓のミクロソーム画分(ホモゲナイズ後に10,000×gで遠心した上清を、さらに100,000×gで遠心したときに得られる沈殿)から界面活性剤を使い酵素活性を可溶化後、数種類のカラムクロマトグラフィーによって部分的に精製した分画を既に得ている。現在、この分画を質量分析計で解析することによって部分アミノ酸配列を決定するための条件を検討中である。

Research Products

• [Journal Article] Identification of T cell death-associated gene 8 (TDAG8) as a novel acid sensing G-protein-coupled receptor. (2005)
  • Author(s): Ishii, S., Kihara, Y., Shimizu, T.
  • Journal Title: J.Biol.Chem. 280 Pages: 9083-9087
• [Journal Article] Stimulation of erythrocyte ceramide formation by platelet activating factor. (2005)
  • Author(s): Lang, P.A., Kempe, D.S., Tanneur, V., Eisele, K., Klarl, B.A., Myssina, S., Jendrossek, V., Ishii, S., Shimizu, T., Waidmann, M., Hessler, G., Huber, S.M., Lang, F., Wieder, T.
  • Journal Title: J.Cell Sci. 118 Pages: 1233-1243
• [Journal Article] Platelet activating factor receptor deficient mice have an improved host defense against pneumococcal pneumonia. (2004)
  • Author(s): Rijneveld, A.W., Weijer, S., Florquin, S., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • Journal Title: J.Infect.Dis. 189 Pages: 711-716
• [Journal Article] Trophic signals acting via phosphatidylinositol-3 kinase are required for normal pre-implantation mouse embryo development. (2004)
  • Author(s): Lu, P., Chandrakanthan, V., Cahana, A., Ishii, S., O'Neill, C.
  • Journal Title: J.Cell Sci. 117 Pages: 1567-1576
• [Journal Article] Platelet-activating factor receptor develops airway hyperresponsiveness independently of airway inflammation in a murine asthma model. (2004)
  • Author(s): Ishii, S., Nagase, T., Shindou, H., Takizawa, H., Ouchi, Y., Shimizu, T.
  • Journal Title: J.Immunol. 172 Pages: 7095-7102
• [Journal Article] Absence of platelet-activating factor receptor protects mice from osteoporosis following ovariectomy. (2004)
  • Author(s): Hikiji, H., Ishii, S., Shindou, H., Takato, T., Shimizu, T.
  • Journal Title: J.Clin.Invest. 114 Pages: 85-93
• [Journal Article] Dyslipidemia associated with atherosclerotic disease systemically alters dendritic cell mobilization. (2004)
  • Author(s): Angeli, V, Llodra, J., Rong, J.X., Satoh, K, Ishii, S., Shimizu, T., Fisher, E.A., Randolph, G.J.
  • Journal Title: Immunity 21 Pages: 561-574
• [Journal Article] Platelet-activating factor receptor deficient mice show an unaltered clearance of Haemophilus influenzae from their respiratory tract. (2004)
  • Author(s): Branger, J., Wieland, C.W., Florquin, S., Maris, N.A., Pater, J.M., Speelman, P., Shimizu, T., Ishii, S., van der Poll, T.
  • Journal Title: Shock 22 Pages: 543-547