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2004 Fiscal Year Annual Research Report

Gemininノックアウトマウスを用いた複製開始機構の解析

Research Project

Project/Area Number 16026202
Research InstitutionTohoku University

Principal Investigator

中山 啓子  東北大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (60294972)

KeywordsGeminin / 前複製複合体 / Cdt1 / 細胞周期 / 蛍光顕微鏡
Research Abstract

GemininはDNA複製のライセンシング因子であるCdt1と結合し、Cdt1の前複製複合体(preRC)との結合を阻害する分子である。Gemininが分解することによってCdt1は遊離しpreRCと結合することによて複製が開始すると考えられている。
すでにわれわれはGemininノックアウトマウスを作製し胎生7.5日には死亡することを確認していた。そこで本年度は、3.5日胚を回収し、その形態学的特徴を調べると同時に培養によって分化誘導を行った。その際、遺伝子型を決定するためのスクリーニング法の開発を行った。
まず、3.5日胚を母体子宮より回収し3時間培養した。その際、Nocodazol処理によって細胞周期のM期に同調させると同時に、培養液中にBrdUを添加しS期の細胞をラベルした。その後、パラホルムアルデヒドで固定し、抗リン酸化ヒストンH3抗体及び抗BrdU抗体にて免疫染色を行った。蛍光ラベルした2次抗体を用いて発色した3.5日胚を封入剤中に滴下し倒立蛍光顕微鏡で観察した。その後、封入剤をPBSで洗い、胚全体をプロテネースKで処理し、PCR反応を行い胚の遺伝子型の決定を行った。この結果、Gemininノックアウトマウスは、3.5日胚で、S期細胞が野生型に比較し少なく、逆にDNA含量が増加したことを伺わせる巨大な核をともなった大きな核が観察された。この結果は、カエル胚などで観察されていたGemininの機能がほ乳類胚でも機能していることを示唆している。

  • Research Products

    (15 results)

All 2005 2004

All Journal Article (15 results)

  • [Journal Article] Molecular dissection of the interaction between p27 and KPC, the ubiquitinligase that regulates proteolysis of p27 in G1 phase.2005

    • Author(s)
      Kotoshiba S. et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. (発表予定)

  • [Journal Article] Disappearance of p27(KIP1) and increase in proliferation of the lens cells after extraction of most of the fiber cells of the lens.2005

    • Author(s)
      Kase, S. et al.
    • Journal Title

      Curr. Eye Res. (発表予定)

  • [Journal Article] p107 inhibits G1 to S phase progression by down-regulating expression of the F-box protein Skp2.2005

    • Author(s)
      Rodier, G. et al.
    • Journal Title

      J. Cell Biol. 168

      Pages: 55-66

  • [Journal Article] Skp2-mediated degradation of p27 regulates progression into mitosis.2004

    • Author(s)
      Nakayama, K. et al.
    • Journal Title

      Dev. Cell 6

      Pages: 661-672

  • [Journal Article] Cytoplasmic ubiquitin ligase KPC regulates proteolysis of p27Kip1 at G1 phase.2004

    • Author(s)
      Kamura, T. et al.
    • Journal Title

      Nature Cell Biol. 6

      Pages: 1229-1235

  • [Journal Article] The ISG15 isopeptidase UBP43 is regulated by proteolysis via the SCF(Skp2) ubiquitin ligase.2004

    • Author(s)
      Tokarz, S.A. et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 46424-46430

  • [Journal Article] Early embryonic death in mice lacking the beta-catenin-binding protein Duplin.2004

    • Author(s)
      Nishiyama, M. et al.
    • Journal Title

      Mol.Cell.Biol. 24

      Pages: 8386-8394

  • [Journal Article] Distinct roles of c-Abl and Atm in oxidative stress response are mediated by protein kinase C delta.2004

    • Author(s)
      Li, B.et al.
    • Journal Title

      Genes Dev. 18

      Pages: 1824-1837

  • [Journal Article] Involvement of p27KIP1 in the proliferation of the developing corneal endothelium.2004

    • Author(s)
      Yoshida, K. et al.
    • Journal Title

      Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 45

      Pages: 2163-2167

  • [Journal Article] The papillomavirus E7 oncoprotein is ubiquitinated by UbcH7 and Cullin 1- and Skp2-containing E3 ligase.2004

    • Author(s)
      Oh, K.J.et al.
    • Journal Title

      J.Virol. 78

      Pages: 5338-5346

  • [Journal Article] Involvement of p27(KIP1) in proliferation of the retinal pigment epithelium and ciliary body.2004

    • Author(s)
      Yoshida, K. et al.
    • Journal Title

      Anat.Embryol. 208

      Pages: 145-150

  • [Journal Article] Distribution of p27(KIP1), cyclin D1,and proliferating cell nuclear antigen after retinal detachment.2004

    • Author(s)
      Yoshida, K. et al.
    • Journal Title

      Graefes Arch.Clin.Exp.Ophthalmol. 242

      Pages: 437-441

  • [Journal Article] Phosphorylation-dependent degradation of c-Myc is mediated by the F-box protein Fbw7.2004

    • Author(s)
      Yada, M. et al.
    • Journal Title

      EMBO J. 23

      Pages: 2116-2125

  • [Journal Article] Mouse Fbw7/Sel-10/Cdc4 is required for Notch degradation during vascular development.2004

    • Author(s)
      Tsunematsu, R. et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 279

      Pages: 9417-9423

  • [Journal Article] Role of serine 10 phosphorylation in p27 stabilization revealed by analysis of p27 knock-in mice harboring a serine 10 mutation.2004

    • Author(s)
      Kotake, Y. et al.
    • Journal Title

      J.Biol.Chem. 280

      Pages: 1095-1102

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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