2005 Fiscal Year Annual Research Report
染色体分配に必須なセントロメアの核内機能構築の分子基盤
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16084207
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
高橋 考太 久留米大学, 分子生命科学研究所, 教授 (40303804)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
深川 竜郎 国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 助教授 (60321600)
石井 浩二郎 久留米大学, 分子生命科学研究所, 講師 (40360276)
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| Keywords | セントロメア / 染色体 / CENP-A / Mad2 / siRNA / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
セントロメア複合体と染色体機能発現に重要なRNAi装置および染色体制御に必須なスピンドル形成チェックポイント(SAC)の分子機構について解析した。
(1)SACのメディエーター分子であるMad2のキネトコア局在機構について、張力チェックポイント分子Bub1およびDASH複合体が協調的に働いていることを見いだし、そのM期における機能ダイナミクスを張力が発生しないキネトコアを人為的に作り出すことにより検証した。またCENP-AのG2ローディング機構についてヒストンシャペロンHIRAの関与を同定した。
(2)分裂酵母セントロメアDNA中で異所的ヘテロクロマチン誘導能力を持つ部分は、セントロメアでのsiRNAの産生源に相当していたが、異所的ヘテロクロマチンの近傍への拡大反応はsiRNAの配列に拘束されないことを示した。siRNA産生経路は主にヘテロクロマチンの確立に寄与しており、siRNAの前駆体RNAの転写はそのDNA部位のヘテロクロマチン化を引き起こすことを明らかにした。また、分裂酵母で内因性siRNAが相同な転写産物の二次的siRNA産生を誘起することを示した。
(3)DT40細胞を用いたセントロメアおよびヘテロクロマチン構築の解析として、RNAi装置関連タンパク質のArgonaute3および4のノックアウト細胞株を樹立して、ノックアウト株の網羅的な転写物の解析を行った。その結果、RNAi装置の破壊で転写が向上する遺伝子を複数同定したが、ヘテロクロマチン構築との関連は現時点で不明である。また、新しく同定したセントロメアタンパク質については、複数のノックアウト細胞を樹立して表現型を解析した結果、CENP-Hを含む複合体が少なくとも3種類のサブ複合体から成ることを明らかにできた。これらのノックアウト細胞を用いて、高等動物のセントロメア構築に関する分子機構の解明を進めている。
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