2006 Fiscal Year Annual Research Report
染色体分配に必須なセントロメアの核内機能構築の分子基盤
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16084207
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| Research Institution | Kurume University |
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Principal Investigator |
高橋 考太 久留米大学, 分子生命科学研究所, 教授 (40303804)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
深川 竜郎 国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 助教授 (60321600)
石井 浩二郎 久留米大学, 分子生命科学研究所, 講師 (40360276)
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| Keywords | セントロメア / 染色体 / CENP-A / Mad2 / siRNA / 細胞周期 |
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| Research Abstract |
セントロメア複合体、染色体機能発現に重要なRNAi装置、ゲノムに散在する反復配列について以下の結果を得た。(1)分裂酵母DASH複合体破壊株およびセントロメア蛋白質伽8変異株群の分子遺伝学的解析から、DASH複合体がセントロメア機能異常により誘起されるチェックポイントのサイレンシング過程に関与することを示した。(2)分裂酵母ゲノムに3コピー散在するヒストンH3、H4遺伝子の転写制御を定量的に解析、3つの全く同じ蛋白質をコードする遺伝子が異なった転写制御を受け、反復遺伝子間に複雑なフィードバック制御が存在することを示した。(3)分裂酵母セントロメアヘテロクロマチンDNAから産出されるsiRNAの作用機序を解析、内因性siRNAを含むRNA干渉エフェクター複合体は、相同なRNAに配列依存的に強く作用し、RNA発生源であるDNA領域のクロマチン構造制御には弱い効果のみを示すことを見いだした。細胞質で機能するsiRNA特異的なヌクレアーゼEri1の不活性化は、siRNAのクロマチン制御効果に影響を与えず、主要反応経路の細胞核構造への限定を結論づけた。(4)DT40細胞を用いて、1)RNAi装置関連蛋白質のノックアウト細胞を樹立しその表現型を解析、Ago3と染色体凝縮の関連を示唆する結果を得た。2)キネトコア蛋白質CENP-H結合蛋白質群の解析を行い、それらがキネトコア形成に重要な働きを担うことを示した。またこれらの蛋白質がノックアウトされた細胞において微小管とセントロメアの結合性を解析、結合はするものの張力が弱いこと示唆する結果を得た。これらノックアウト細胞を用い、高等動物セントロメア構築に関する分子機構の詳細な解明を進めている。
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