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2004 Fiscal Year Annual Research Report

遺伝子改変技術を用いたてんかんモデルラットの開発研究

Research Project

Project/Area Number 16200029
Research Category

Grant-in-Aid for Scientific Research (A)

Research InstitutionKyoto University

Principal Investigator

芹川 忠夫  京都大学, 医学研究科, 教授 (30025655)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 庫本 高志  京都大学, 医学研究科, 講師 (20311409)
篠原 隆司  京都大学, 医学研究科, 教授 (30322770)
Keywordsラット / てんかん / ミュータジェネシス / エチルニトロソウレア / クロラムブチル / 疾患モデル / てんかん遺伝子 / 遺伝子改変ラット
Research Abstract

エチルニトロソウレア(ENU)誘発変異ラットから標的遺伝子をスクリーニングする方法によって、てんかん遺伝子変異ラットを作製する。ACI/NSlc, BN/SsNSlc, F344/NSlcの3系統に20mg/kg, 30mg/kg, 45mg/kgを、それぞれ雄に2回投与後、同系統の雌と交配して平均産子数を求めた。
その結果、最も効率的にENUミュータジェネシスを行うには、F344/NSlcに40mg/kgのENUを9週齢時と10週齢時に投与することが適当であると判断した。ENUによるてんかん遺伝子変異ラットの作製にあたって、12個のヒトてんかん関連遺伝子(LGI1,EPM1,EPM2,CHRNA4,CHRNB2,GABRA1,GABRG3,CLCN2,SCN1A, CACNB4,KCNQ2,KCNQ3)のラットホモログに対し、ラットゲノムシークエンス(Ensemb1)データベースからそれぞれの遺伝子の全エクソンを増幅するように152セットのPCRプライマーを作製した。それぞれのエクソンに対しエクソン・イントロン境界領域から20-100bp以内のイントロン領域にプライマーをデザインしており、合計50,119bpをスクリーニングしている。
また、スクリーニング方法としては、PCR産物のダイレクトシークエンスに加えて、より効率的な突然変異検出法を検討した。てんかん遺伝子存在領域の欠失変異ラットの作製には、クロラムブチル(CHL)を5mg/kg,10mg/kg,15mg/kgの3群に分けて、BN/SsNSlc雄ラットに投与した。
その後3,4,5,6,7週目に、Wistar/STラットと交配して、それぞれの平均産子数を求めた。その結果、CHLミュータジェネシスとして、CHL 5mg/kgを投与後5週目にF344/NSlcと交配することが適当であると判断した。

  • Research Products

    (10 results)

All 2005 2004

All Journal Article (10 results)

  • [Journal Article] Spermatogenesis from epiblast and primordial germ cells following transplantation into postnatal mouse testis.2005

    • Author(s)
      Chuma S, et al.
    • Journal Title

      Development. Jan ; 132(1)

      Pages: 117-122

  • [Journal Article] Genetic selection of mouse male germline stem cells in vitro : offspring from single stem cells.2005

    • Author(s)
      Kanatsu-Shinohara M, et al.
    • Journal Title

      Biol Reprod. Jan ; 72(1)

      Pages: 236-240

  • [Journal Article] Rat Phenome Project : the untapped potential of existing rat strains.2005

    • Author(s)
      Mashimo T, et al.
    • Journal Title

      J Appl Physiol Jan ; 98(1)

      Pages: 371-379

  • [Journal Article] Generation of pluripotent stem cells from neonatal mouse testis.2004

    • Author(s)
      Kanatsu-Shinohara M, et al.
    • Journal Title

      Cell. 29 ; 119(7)

      Pages: 1001-1012

  • [Journal Article] Transgenic mice Produced by retroviral transduction of male germline stem cells in vivo.2004

    • Author(s)
      Kanatsu-Shinohara M, et al.
    • Journal Title

      Biol Reprod Oct ; 71(4)

      Pages: 1202-1207

  • [Journal Article] Rat genome sequencing and rat resources in Japan.2004

    • Author(s)
      Serikawa T.
    • Journal Title

      Tanpakushitsu Kakusan Koso. Oct ; 49(13)

      Pages: 2139-2148

  • [Journal Article] Immunohistochemical and morphometrical studies on myelin breakdown in the demyelination (dmy) mutant rat.2004

    • Author(s)
      Kuwamura M, et al.
    • Journal Title

      Brain Res. 1022(1-2)

      Pages: 110-116

  • [Journal Article] Antiepileptic effects of single and repeated oral administrations of S-312-d, a novel calcium channel antagonist, on tonic convulsions in spontaneously epileptic rats.2004

    • Author(s)
      Amano T, et al.
    • Journal Title

      J Pharmacol Sci. Jul ; 95(3)

      Pages: 355-362

  • [Journal Article] Colourful history of Japan's rat resources.2004

    • Author(s)
      Serikawa T.
    • Journal Title

      Nature. May6 ; 429(6987)

      Pages: 15

  • [Journal Article] Adenoviral gene transfer of aspartoacylase ameliorates tonic convulsions of spontaneously epileptic rats.2004

    • Author(s)
      Seki T.et al.
    • Journal Title

      Neurochem Int. Jul ; 45(1)

      Pages: 171-178

URL: 

Published: 2006-07-12   Modified: 2016-04-21  

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