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2006 Fiscal Year Annual Research Report

ヒトゲノム機能解析のためのsiRNAライブラリの構築とRNAi関連遺伝子の探索

Research Project

Project/Area Number 16201040
Research InstitutionThe University of Tokyo

Principal Investigator

西郷 薫  東京大学, 大学院理学系研究科, 教授 (50136454)

Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) 程 久美子  東京大学, 大学院理学系研究科, 助教授 (50213327)
KeywordsRNA interference / RNAi / siRNA / human / genome / 機能解析 / siRNAライブラリ / RNAi関連遺伝子
Research Abstract

ヒトをはじめとする様々な哺乳類ゲノムプロジェクトの進行により哺乳類の遺伝情報を担うおおよその遺伝子が特定され、ゲノム研究は、その構造解析から機能解析に焦点が移ってきたと言える。本研究での目的は、ヒトを含む哺乳類のゲノム機能解明のためのRNAi関連技術を開発し、siRNAミニライブラリを構築して、スクリーニングを行うことである。我々は、極めて商い効率で標的遺伝子を抑制することができる21bpのsiRNAの配列設計法を開発し、ウェブサイト(siDirect)上に公開している。DNAペクター型RNAiでは、stem-loop型のRNAが転写され、2本鎖RNA切断酵素(Dicer)による切断を受け成熱型siRNAとなる。しかし、Dicerの作用機序の解析から、細胞内では、必ずしも21bpのみではなく、22bpのsiRNAも成熟型として合成されることがわかった。そこで、我々は有効な22bpsiRNAでも、効率良くRNAiを誘導することが可能な配列規則性を明らかにした。さらに、化学修飾により非標的遺伝子に対するoff-target効果を減弱する可能性を検討した。またRNAiにおけるRLC形成に関わるR2D2、TRBP2、PACTのsiRNAやその誘導体への結合を調べ、RNAはその結合に必須であることを明らかにした。構築した約1400遺伝子に対するshRNAライブラリを用いてRNAi効果に影響を与える遺伝子群のスクリーニングを行った。その結果、約270の遺伝子(約20%)がRNAi効果に何らかの影響を与える遺伝子候補となり得ることがわかり、現在さらなる絞り込みを行っている。

  • Research Products

    (7 results)

All 2007 2006 Other

All Journal Article (6 results) Book (1 results)

  • [Journal Article] LARK activates post-transcriptional expression of an essential mammalian clock protein, PERIOD1.2007

    • Author(s)
      Kojima, S.
    • Journal Title

      Proc. Natl. Acad. Sci., USA 104・6

      Pages: 1859-1864

  • [Journal Article] Crystallization and preliminary X-ray analysis of the C-terminal RNase III domain of human Dicer.2006

    • Author(s)
      Takeshita, D
    • Journal Title

      Acta Crystallographica F62

      Pages: 402-404

    • Description
      「研究成果報告書概要(和文)」より
  • [Journal Article] Guidelines for the selection of functional siRNA sequences for mammalian RNAi.2006

    • Author(s)
      Ui-Tei, K.
    • Journal Title

      Methods in Mol. Biol. 361

      Pages: 201-216

  • [Journal Article] Essential notes regarding the design of functional siRNAs for efficient mammalian RNAi2006

    • Author(s)
      Ui-Tei, K.
    • Journal Title

      Journal of Biomedicine and Biotechnology 2006(4)

      Pages: 65052-65059

  • [Journal Article] siVirus : web-based antiviral siRNA design software for highly divergent2006

    • Author(s)
      Naito, Y.
    • Journal Title

      Nucleic Acids Res. 34

      Pages: W448-450

  • [Journal Article] Crystal structure of the PIN domain of human telomerase-associated protein EST1A.

    • Author(s)
      Takeshita, D.
    • Journal Title

      Proteins (In press)

  • [Book] Sequence requirements for effective mammalian RNAi induced by short double-stranded RNAs equal to or more than 22bp in length.

    • Author(s)
      Ui-Tei, K.
    • Publisher
      Nova Science Publishers, Inc. (In press)

URL: 

Published: 2008-05-08   Modified: 2016-04-21  

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