エクトドメインシェディングの意義と分子メカニズムの解明

2005 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16207014
• Research Institution: Osaka University
• Principal Investigator: 目加田 英輔 大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (20135742)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 岩本 亮 大阪大学, 微生物病研究所, 助教授 (10213323) ; 水島 寛人 大阪大学, 微生物病研究所, 助手 (30379094)
• Keywords: エクトドメインシェディング / HB-EGF / シグナル伝達

Research Abstract

エクトドメインシェディングとは、細胞膜蛋白質が細胞表面でプロテアーゼによる切断を受け、その細胞外ドメインが培養液中に放出される現象を言う。本研究の目的は、HB-EGFシェディング機構全容の解明にむけて、シェディングに関る分子群を明らかにし、シェディングの調節機構と生物学的意義の解明を行うことである。この目的のため、以下の実験を行った。HB-EGFを発現した細胞を用いて、siRNA法で切断を促進する遺伝子、抑制する遺伝子、のスクリーニングを行った。具体的には、レトロウィルスベクターにクローニングしたsiRNAライブラリーをHB-EGF発現細胞に感染させて、セレクションマーカーでセレクションの後、切断刺激を加えてもシェディングを起こさない細胞、あるいは反対に切断刺激を加えなくてもシェディングが起こっている細胞をcell sorterもしくはHB-EGF抗体結合磁気ビーズを用いて選別し、得られた細胞から、どの遺伝子が抑制されているかを明らかにし、エクトドメインシェディングに関わる遺伝子の同定を試みた。この結果明らかにエクトドメインシェディングが抑制されたと思われる細胞群を得ることができ、その細胞に含まれるsiRNAの同定を行った。これらの中には、細胞内シグナル伝達に関わる遺伝子、プロテアーゼの輸送や活性化に関わる遺伝子、に対するsiRNAが含まれていた。

Research Products

• [Journal Article] Cytoplasmic Domain Phosphorylation of Heparin-Binding EGF-like Growth Factor. (2006)
  • Author(s): Wang, X., Mizushima, H., Adachi, S., Oishi, M., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • Journal Title: Cell Struct.Funct. (in press.)
• [Journal Article] HB-EGF promotes epithelial cell migration in eyelid development. (2005)
  • Author(s): Mine, N., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • Journal Title: Development 132 Pages: 4317-4326
• [Journal Article] Clinical significance of heparin-binding epidermal growth factor-Like growth factor in peritoneal fluid of ovarian cancer. (2005)
  • Author(s): Yagi, H., Miyamoto, S., Tanaka, Y., Sonoda, K., Kobayashi, H., Kishikawa, T., Iwamoto, R., Mekada, E., Nakano, H.
  • Journal Title: Brit.J.Cancer 92 Pages: 1737-1745
• [Journal Article] Heparin-binding EGF-like growth factor accelerates keratinocyte migration and skin wound healing. (2005)
  • Author(s): Shirakata, Y., Kimura, K., Nanba, D., Iwamoto, R., Tokumaru, S., Morimoto, C., Yokota, K., Nakamura, M., Sayama, K., Mekada, E., Higashiyama, S., Hashimoto, K.
  • Journal Title: J.Cell Sci. 118 Pages: 2363-2370
• [Journal Article] Clinical significance of heparin-binding EGF (epidermal growth factor)-like growth factor and ADAM (a disintegrin and metalloprotease) 17 expression in human ovarian cancer. (2005)
  • Author(s): Tanaka, T., Miyamoto, S., Suzuki, S.O., Oki, E., Yagi, H., Sonoda, K., Yamazaki, A., Mizushima, H., Maehara, Y., Mekada, E., Nakano, H.
  • Journal Title: Clin.Cancer Res. 11 Pages: 4783-4792
• [Journal Article] Soluble form of heparin-binding EGF-like growth factor contributes to retinoic acid-induced epidermal hyperplasia. (2005)
  • Author(s): Kinmura, R., Iwamoto, R., Mekada, E.
  • Journal Title: Cell Struct.Funct. 30 Pages: 35-42