2004 Fiscal Year Annual Research Report
遺伝性筋疾患の治療法の開発を目指した骨格筋再生の分子機構の解明
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16300132
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Osaka University |
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Principal Investigator |
山元 弘 大阪大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (50127312)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
辻川 和丈 大阪大学, 大学院・薬学研究科, 助手 (10207376)
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| Keywords | 筋衛星細胞 / 筋再生 / マクロファージ / 幹細胞 / サイトカイン / 遺伝子チップ |
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| Research Abstract |
マウス筋衛星細胞特異的モノクロナル抗体、SM/C2.6を樹立し、これを用いてマウス骨格筋から筋衛星細胞を単離精製することに成功した(Exp.Cell Research,2004)。さらに、静止期筋衛星細胞が発現する遺伝子について、遺伝子チップを用いた網羅的解析を進め、多数の遺伝子を同定した(深田ら、論文投稿中)。一方これまでに、再生が始まる時期と同期して、再生筋組織にマクロファージが多量に浸潤すること、さらにマクロファージが欠損した条件下では筋再生はほとんど進行せず、むしろ線維の増生が盛んになることがわかっている(瀬川ら、論文準備中)。
そこでマクロファージが産生する何らかの因子が筋再生に働いている可能性があると考え、再生途中にある骨格筋のサイトカインmRNA解析(ノザンブロット法によるアレイ解析)を進めたが、TGFβ以外には特徴的な遺伝子発現の変化は認められなかった。TGFβは、筋再生過程で線維芽細胞に働き、膠原線維の増生を促進していると考えられ、筋衛星細胞に働き、筋衛星細胞の増殖分化に働くサイトカインとは考えられないことがわかった。
マクロファージが産生し、筋衛星細胞に働く生理活性分子を同定するためには、再生途中の骨格筋から浸潤しているマクロファージのみを単離精製し、それが発現している遺伝子を同定しなければならない。この目的のために、カルジオトキシンにより再生を誘導したマウス骨格筋から、マグネットビーズ法でマクロファージの精製を試み、90%以上の純度で精製することができた。
現在、精製マクロファージの網羅的遺伝子チップ解析を進めており、正常マクロファージもしくは活性化マクロファージと比較して、再生途中の骨格筋のマクロファージに特徴的に認められる遺伝子を調べている。
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