2004 Fiscal Year Annual Research Report
プロテオミクス手法と結晶構造解析を用いた血管病態の機序解明及び診断と治療法の開発
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16310138
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
鈴木 亨 東京大学, 医学部附属病院, 科学技術振興特任教員 (90359620)
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| Keywords | プロテオミクス / 転写因子 |
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| Research Abstract |
本計画の目的は、血管疾患の病態形成において重要な役割を果たす因子(病態因子)を、プロテオミクス手法(質量分析法中心)を用いて単離・同定することである。また、結晶構造解析で作用機序の物理化学的な基盤を明らかにする。さらに、病態因子が関わる新規な病態機序に基づく診断法ならびに治療法を開発する。
本年度は以下の成果をあげた。
・血管病態の重要な発症因子であるKLF5を用いた相互作用因子のプロテオミクス探索を行い、転写抑制因子SETの単離に成功した(Suzuki et al., 2003, J Biol Chem, Mol Cell Biol)。本年度は、SETの結晶構造を解析し、結晶作製に成功し、2.8オングストロームの解像度の回折像を得た(Muto et al., 2004)。今後、さらに共結晶の構造を解き、ドラッグデザインを行う予定である。
・上記KLF5は炎症に寄与することをノックアウトマウスで明らかにした(Shindo et al.,2002)。そ.のメカニズムを解析した結果、病態発症時にKLF5が下流遺伝子PDGF-A鎖遺伝子を活性化する際に、誘導されたKLF5がdelayed inductionに寄与し、そのメカニズムには炎症の病態因子NFkappaBのp50サブユニットとの相互作用が重要であることを明らかにした。PDGF-A鎖のdelayed induction活性化のメカニズムの解明またNFkappaBの関与をはじめて示した(Aizawa et al.,2004)。これらの知見をもとに、PDGF-A鎖を標的とした治療薬の開発が可能となる。
・KLF5はアセチル化修飾を中心にアセチル化酵素p300及びアセチル化阻害因子SETにより正負に制御される(Suzuki et al.,2003)。脱アセチル化酵素HDAC1の作用機序について検討した結果、HDAC1はKLF5のDNA結合活性を阻害し、まだPDGF-A鎖の遺伝子発現を抑制し、さらにKLF5への相互作用においてp300と競合することを示した。脱アセチル化酵素が、酵素活性の他に、DNA結合活性の阻害、さらにアセチル化酵素との物理的な競合という直接的な作用を有することをはじめて示した(Matsumura et al., in press)。
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