| Research Abstract |
好熱性放線菌(Thermoactinomyces vulgaris R-47,以下T.vulgaris)は、2つのα-アミラーゼ(TVA1,TVA2)を持つ。TVA1は,菌体外酵素であり,比較的高分子量の基質に対してよく働く。TVA2は菌体内酵素であり,環状オリゴ糖であるシクロデキストリン(CD)の加水分解能力に優れ,α-アミラーゼというよりはシクロデキストリン加水分解酵素として位置づけられる。T.vulgarisのゲノム上TVA2の上流にはCDの運搬に関与すると考えられるABCトランスポーター(CDK),CD結合タンパク質(CDE),および2つのCD膜間輸送担体タンパク質(CDF,CDG)の遺伝子が存在し,下流にはグルコアミラーゼ(TGA)およびこれらの遺伝子群の発現を調節するレプレッサータンパク質(CDI)の遺伝子が存在している。以上のことから,T.vulgarisは,CD代謝・運搬系を持つことが予想される。本研究課題の目的は,これらのタンパク質の3次元構造をX線結晶解析により決定し,CD代謝・輸送マシーナリーについて,構造生物学的に理解することである。
前年度に引き続き,今年度の新たな研究実績は以下の通りである。
(1)TVA1と長いオリゴ糖との複合体のX線結晶構造解析を行い,TVA1の高分子基質認識・加水分解機構に関する新たな知見得て,論文誌に発表した。
(2)TVA2・基質複合体についてX線結晶構造解析を行い,基質認識・加水分解機構に関する新たな知見を得て,論文誌に発表した。
(3)CDEの2.4Å分解能でのX線結晶解析に成功し,学会発表および座標のPDB登録を行った。現在論文誌執筆中である。
(4)膜貫通型タンパク質であるCDF,CDGについてpColdTFベクター(タカラ)を用いて,可溶化タグを有する可溶タンパク質として大腸菌にて大量発現に成功した。
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