2004 Fiscal Year Annual Research Report
分子構造の動的および静的側面から見た転写制御機構に関する研究
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16370051
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| Research Category |
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Yokohama City University |
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Principal Investigator |
緒方 一博 横浜市立大学, 大学院・医学研究科, 教授 (90260330)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐藤 光 横浜市立大学, 医学部, 助手 (90300962)
椎名 政昭 横浜市立大学, 医学部, 助手 (30347299)
浜田 恵輔 横浜市立大学, 医学部, 助手 (00344052)
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| Keywords | 転写制御因子 / 転写制御因子高次複合体 / Runx1 / c-Myb / C / EBP / プロモーター / アロステリック / 核磁気共鳴法 |
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| Research Abstract |
転写制御因子Runx1のDNA結合活性は、DNA非結合性の転写制御因子CBFβとヘテロダイマーを形成することにより上昇することが知られている。本研究室では、以前Runx1-CBFβ-DNA複合体の結晶構造解析を報告し、CBFβによるRunx1のDNA結合活性の上昇がRunx1の構造的揺らぎの安定化によってもたらされることを示唆した。今回、揺らぎと機能との関連を詳細に調べるため、核磁気共鳴法を用いた磁気緩和時間測定を行った。
現在までに、Runx1-DNA複合体およびRunx1-CBFβ-DNA複合体中でのRunx1のアミドプロトンシグナルの帰属をほぼ完了した。磁気緩和パラメーター測定法について、R1,R2およびSteady-state NOEのTROSY化を行い、各複合体中でのRunx1のこれらの磁気緩和パラメーターの測定を終了した。さらに揺らぎの時間スケールを詳細に解析するために、現在T1rhoについて、Mulderらが報告したOff-resonance T1rhoを独自にTROSY化したパルスプログラムを用いて測定中である。
C/EBPは、塩基性ロイシンジッパー型の転写制御因子であるが、他の転写制御因子と異なり、ホモダイマーとして多様な塩基配列を認識することが知られている。この分子機構について調べるため、C/EBPが認識する様々な天然プロモーターの塩基配列を含むDNAとC/EBPとの複合体を形成させ、X線結晶構造解析を行った。また、これらのDNAとC/EBPとの結合活性を生化学的に解析した。現在、C/EBPの1次構造および3次構造から、C/EBPに特徴的な残基を同定し、その残基に変異を導入して同様の解析を行っている。
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