2005 Fiscal Year Annual Research Report
染色体複製開始とその制御を行う、動的かつ複合的蛋白質高次装置の機能構造特性
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16370081
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
片山 勉 九州大学, 薬学研究院, 教授 (70264059)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
植田 正 九州大学, 薬学研究院, 教授 (90184928)
麻生 真理子 九州大学, 薬学研究院, 助手 (30201891)
末次 正幸 九州大学, 薬学研究院, 助手 (00363341)
胡桃坂 仁志 早稲田大学, 大学院・理工学研究科, 助教授 (80300870)
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| Keywords | DNA複製 / DnaA / 細胞周期 / DNAポリメラーゼ / タンパク質複合体 / タンパク質機能構造解析 / ATP / プロテオミクス |
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| Research Abstract |
DnaA蛋白質は複製起点と複製開始複合体を形成して2重鎖DNAの開裂という開始反応を遂行するほか、複製開始制御機構の標的因子ともなっている。本計画研究では、複製開始反応と開始制御反応の分子機構を、DnaAが直接関わる、動的かつ複合的蛋白質相互作用として、特に蛋白質構造に基づいて理解することを目指した。
1.全長DnaAの構造解析と複製開始複合体の構造解明
超好熱菌由来の精製DnaA蛋白質を用い、DNA結合能・高次複合体形成能・複製開始能などに関する機能特性を解明し、論文発表した(Genes to Cells)。超好熱菌由来のDnaA蛋白質のDNAとの共結晶作成を作成した。大腸菌DnaAのN末ドメインのNMR解析をほぼ完遂し、結晶作成も検討した。また、DnaAの機能構造とATP依存的な複合体形成動態との相関解明に成功し、論文発表した(JBC)。さらに、2重鎖DNAの開裂反応に特異的欠損をもつと推測されるDnaA変異体を分離した。
2.RIDA分子機構解明:DnaA/Hda/クランプ相互作用機構・機能構造相関
Hda機能のヌクレオチド結合による制御の分子機構解明を進めた。
Hda-クランプ複合体の機能解析によりRIDA機構解明を進めた(JBCおよびJSB)。
3.DnaA,Hda,クランプ相互作用因子探索
機能未解明だったタンパク質が新規のクランプ結合因子であることを解明し、その機能解析を進めた。
4.新規DnaA相互作用因子の機能構造解析:DnaA-DiaA複合体の機能解析
DiaAの結晶構造解明に成功し、DnaA-DiaA複合体の形成に必要な機能構造の解明を行った。
5.蛋白質構造とその機能特性に基づいた阻害剤設計と開発
DnaAドメインIVにおける機能アミノ酸残基の解析を行った。これに基づき化学修飾オリゴヌクレオチドを設計した。
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