2004 Fiscal Year Annual Research Report
魚類において多様化した補体成分アイソタイプの時空間的機能分化とその分子基盤
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16380135
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Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
中尾 実樹 九州大学, 大学院・農学研究院, 教授 (50212080)
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| Keywords | 補体 / 多様性 / アイソタイプ / コイ / 硬骨魚類 / 遺伝子発現 / 分子間相互作用 / プロモーター |
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| Research Abstract |
本研究は、これまでに同定されているコイ補体成分C3、C4、C5、B因子、C1r/s、MASP、およびI因子のアイソタイプ間の機能分化を、遺伝子およびタンパク質レベルで解析し、補体遺伝子多重化の生物学的な意義を解明することを目的とした。まず、B因子アイソタイプとC3アイソタイプとのタンパク質間相互作用をQCM装置によって解析したところ、B/C2-A1よりもB/C2-A3の方が、C3に対して有意に高い親和性を示し、この高親和性が、B/C2-A3がC3-SアイソタイプとD因子非依存的にC3転換酵素を形成する現象を部分的に説明できる事が判明した。また、上記補体成分アイソタイプmRNAの組織分布をRT-PCR法によって検討したところ、C4、B因子、C1r/sおよびI因子のアイソタイプ間で、産生臓器に違いが認められた。さらに、これらアイソタイプ間の発現パターンの差異がどのような転写制御によるものかを解明するために、λFIXベクターを用いたコイゲノムDNAライブラリーを構築した。まずB/C2-A1アイソタイプ遺伝子を含む約15kbpのゲノムDNA断片をクローニングし、この遺伝子の上流領域の塩基配列を解析したところ、B/C2-A1の肝臓特異的な発現を裏付ける、いくつかの転写調節エレメントが同定された。さらに、B/C2-A1とは大きく異なる発現部位・応答性を示すB/C2-A3アイソタイプについても遺伝子上流領域の塩基配列を解析しB/C2-A1アイソタイプとはことなる転写調節エレメントが同定された。
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