リンパ管が特異的に発現するタンパクとリンパ管新生・再生機構の解析

2004 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 16390047
• Research Category: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• Research Institution: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• Principal Investigator: 大谷 修 富山医科薬科大学, 医学部, 教授 (90127548)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大谷 裕子 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (10313595) ; 松尾 光浩 富山医科薬科大学, 医学部, 助手 (70361954)
• Keywords: リンパ管 / リンパ管内皮細胞 / リンパ管再生 / リンパ管新生 / コラーゲン線維網 / VEGFR-3 / Prox-1 / LYVE-1

Research Abstract

グリーンラットの胸管および乳糜槽から、リンパ管内皮細胞を採取し、窒素ガス・炭酸ガスインキュベータ中において低酸素下で培養し、クローニングした。免疫組織化学によりこの培養細胞がVEGFR-3、Prox-1、LYVE-1等を発現することを確認した。さらに、培養上清および培養細胞のホモジネートからタンパクを抽出し、ウェスタンブロットにより調べた結果、この培養細胞がVEGFR-3等を発現していることが確認できた。リンパ管内皮細胞が特異的に発現する他のタンパクの解析については、実験準備を整えているところである。
ヒト胸管から生体時の構造を保持したコラーゲン線維網を調製し、その上でリンパ管内皮細胞を培養したところ急速に立体的なリンパ管網が形成された。この方法では、コラーゲンコートディッシュやコラーゲンゲル内で培養した場合に比べ、より早く立体的なリンパ管網が構築されることが明らかになった。現在、この方法で再生したリンパ管を蛍光顕微鏡、共焦点レーザ顕微鏡、透過及び走査電子顕微鏡等で観察し、リンパ管再生機構を形態学的に解析しているところである。また、この培養方法の改良を進めると共に、種々の組織由来のコラーゲン線維網を調整して、その上でリンパ管内皮細胞を培養し、リンパ管再生に最も適したリンパ管網を検討中である。
リンパ管内皮細胞および骨髄または末梢血から分離したCD34-/CD31+細胞の生体における動態を調べる実験に関しては、予備的な実験をしているところである。